本文關(guān)鍵詞： FREM基因 豁眼性狀 c DNA克隆 豁眼鵝 基因表達(dá)　出處：《中國農(nóng)業(yè)科學(xué)》2017年12期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：【目的】鵝豁眼性狀呈隱性伴性遺傳,其遺傳基礎(chǔ)有待揭示�；騀RAS-related extracellular matrix 1(FREM1)編碼區(qū)的一些隱性突變導(dǎo)致了人類及模型小鼠上眼瞼部分或完全缺失。本試驗(yàn)以鵝豁眼性狀資源群為主要材料,通過對鵝基因FREM1的克隆、表達(dá)及基因多態(tài)性分析,驗(yàn)證FREM1是影響鵝上眼瞼性狀候選基因的假設(shè),為深入研究眼瞼性狀的分子遺傳機(jī)制奠定基礎(chǔ)�！痉椒ā坎杉Z豁眼性狀F2資源群中成年純種豁眼鵝母鵝(3只)、四川白鵝(6只,雌雄各半)、♂豁眼×♀四川白鵝F1代公鵝(3只)的眼瞼和腎組織,提取其總RNA,以鵝FREM1(XM_013193557)全長轉(zhuǎn)錄序列為參考設(shè)計(jì)引物,利用反轉(zhuǎn)錄RT-PCR克隆鵝FREM1基因,對其進(jìn)行生物信息學(xué)分析,進(jìn)而,采用實(shí)時熒光定量PCR法研究鵝眼瞼和腎組織FREM1基因的表達(dá)特性。采集成年純種豁眼鵝公鵝、四川白鵝公鵝和♂豁眼×♀四川白鵝正反交F1代公鵝各30只的血液,提取全血DNA,以鵝FREM1(Anser cygnoides domesticus breed Zhedong scaffold203_32,NCBI)序列設(shè)計(jì)引物,利用直接測序法檢測FREM1基因變異位點(diǎn)在不同鵝群體中的分布情況。【結(jié)果】(1)經(jīng)測序和拼接,獲得鵝FREM1基因c DNA序列7 305bp,該序列包含一個完整的CDS(Coding Sequences)區(qū),編碼2 184個氨基酸。與四川白鵝和浙東白鵝相比,在豁眼鵝FREM1基因CDS序列上發(fā)現(xiàn)第4 515bp:TC是錯義突變,導(dǎo)致第1 505aa:ValAla變化,位于FREM1蛋白的CSPG重復(fù)結(jié)構(gòu)域中第10個CSPG上。利用在線工具SIFT預(yù)測該氨基酸替換對蛋白功能的影響較小。通過I-MutantΔΔG和MUPro程序分析,p.1505VA位點(diǎn)氨基酸替換大幅度降低了FREM1蛋白的穩(wěn)定性。(2)FREM1基因在四川白鵝公、母鵝的眼瞼和腎臟2個組織中均有表達(dá),但腎臟表達(dá)水平遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于眼瞼,更為重要的是,公鵝FREM1基因的組織表達(dá)水平正好接近母鵝的2倍。ZHW(正常眼瞼)和ZhW(上眼瞼部分缺失)基因型鵝FREM1基因相對表達(dá)量無差異(P0.05),雖然ZHZh(正常眼瞼)基因型鵝的FREM1基因相對表達(dá)量是ZHW和ZhW基因型鵝的2倍多,但這可能是性別不同導(dǎo)致的差異。(3)豁眼鵝群體中基因型HH、Hh和hh的頻率分別是0、0和1.0,等位基因H和h的頻率分別是0和1.0,雜合度為0;四川白鵝群體中基因型HH、Hh和hh的頻率分別是1.0、0和0,等位基因H和h的頻率分別是1.0和0,雜合度為0;F1代群體中基因型HH、Hh和hh的頻率分別是0、1.0和0,等位基因H和h的頻率分別是0.5和0.5,雜合度為1.0。【結(jié)論】基因FREM1是決定鵝上眼瞼性狀的H基因座,該基因編碼區(qū)1個純合型錯義突變導(dǎo)致了FREM1蛋白第10個CSPG結(jié)構(gòu)域的變化,從而影響了FREM1蛋白的穩(wěn)定性,基因FREM1的c.4514TC突變可作為鵝豁眼性狀重要的分子標(biāo)記。
[Abstract]:[objective] the traits of geese with eye exclusion were inherited by recessive sex. Some recessive mutations in the coding region of FRAS-related extracellular matrix 1 (FREM1) resulted in partial or complete loss of upper eyelid in human and model mice. In this study, the Goose character resource group was used as the main material, and the goose gene FREM1 was cloned. Expression and gene polymorphism analysis to verify the hypothesis that FREM1 is a candidate gene affecting upper eyelid traits in geese. [methods] to study the molecular genetic mechanism of eyelid traits. [methods] three adult pure female geese and six Sichuan white geese were collected from F2 resource group. 鈾侽pen eye 脳. 鈾，

本文編號：1528484