本文關(guān)鍵詞： 豬圓環(huán)病毒 穿透肽 核定位信號(hào) 侵染機(jī)制 內(nèi)吞途徑 TAT蛋白　出處：《湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)》2015年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：豬圓環(huán)病毒(Porcine Circovirus,PCV)屬于圓環(huán)病毒科,圓環(huán)病毒屬,單鏈環(huán)狀DNA病毒,分為豬圓環(huán)病毒1型和豬圓環(huán)病毒2型兩個(gè)亞型,其中1型不致病,2型能引起豬圓環(huán)病毒相關(guān)疾病(Porcine circovirus diseases, PCVDs)。本文以豬圓環(huán)病毒為主要研究對(duì)象,重點(diǎn)對(duì)豬圓環(huán)病毒的核定位信號(hào)(Nuclear localization signal,NLS)功能區(qū)域進(jìn)行了全面的研究。圓環(huán)病毒的核定位信號(hào)功能區(qū)域,即N端的41個(gè)氨基酸,位于病毒顆粒的內(nèi)部,與病毒遺傳物質(zhì)相連,除了有核定位的作用以外,暫無相關(guān)研究明確表明其具有其它作用。本文從病毒的氨基酸序列出發(fā),通過序列比對(duì)分析,發(fā)現(xiàn)其具有大量的帶正電荷的氨基酸精氨酸,由此我們提出假設(shè)——PCV2的核定位信號(hào)區(qū)域具有細(xì)胞穿透肽的作用,即具有細(xì)胞膜透性。為了證明以上假設(shè),首先我們將PCV2 Cap NLS區(qū)域與綠色熒光蛋白eGFP融合后表達(dá)純化得到蛋白PCV2-NLS-eGFP,然后侵染細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)該蛋白PCV2-NLS-eGFP能進(jìn)入PK15細(xì)胞和SF9細(xì)胞,同時(shí)我們將核定位細(xì)胞的41個(gè)氨基酸按照精氨酸富集情況分成兩部分,進(jìn)行人工合成,前20個(gè)氨基酸組成的多肽命名為NLS-A,后面21個(gè)氨基酸則命名為NLS-B,并分別在其N端用綠色熒光染料FITC修飾,發(fā)現(xiàn)多肽NLS-A能有效的攜帶綠色熒光燃料FITC進(jìn)入細(xì)胞,NLS-B則不能。在觀察NLS-A進(jìn)入細(xì)胞的過程中,我們發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組NLS-A侵染的細(xì)胞的熒光強(qiáng)度要比陽性對(duì)照TAT侵染的細(xì)胞強(qiáng),所以接下來我們進(jìn)一步通過流式細(xì)胞分析技術(shù)對(duì)相同摩爾濃度的多肽NLS-A和經(jīng)典的細(xì)胞穿透肽TAT攜帶FITC進(jìn)入細(xì)胞的效率進(jìn)行比較分析,發(fā)現(xiàn)NLS-A攜帶FITC進(jìn)入細(xì)胞的效率要高于TAT；同時(shí)我們也對(duì)NLS-A進(jìn)入細(xì)胞的機(jī)制進(jìn)行了相關(guān)的研究,在相對(duì)較低的濃度時(shí)(10μ M以下時(shí)),NLS-A主要通過一些傳統(tǒng)的endocytosis的途徑進(jìn)入細(xì)胞,而在相對(duì)較高的濃度時(shí)(10μM以上時(shí)),NLS-A除了通過傳統(tǒng)的內(nèi)吞途徑進(jìn)入細(xì)胞外,還存在一種快速進(jìn)入細(xì)胞的方式,目前還沒有有利的證據(jù)證明該方式的詳細(xì)機(jī)制。TAT蛋白作為一類經(jīng)典的細(xì)胞穿透肽,自從發(fā)現(xiàn)以來在藥物傳送以及疾病治療中有許多重要的研究,由此可以推斷NLS-A將會(huì)在這方面具有重大的應(yīng)用潛能。豬圓環(huán)病毒的核定位信號(hào)作為其衣殼蛋白的一部分,參與病毒顆粒的組成,本文對(duì)其核定位信號(hào)是一種穿透肽的證明,也說明了PCV2的NLS功能區(qū)有可能在病毒的侵染過程中起著重要作用。
[Abstract]:Porcine Circlip ( PCV ) belongs to the family of circular viviridae , circular ring virus and single - stranded circular DNA . It is divided into two subtypes of porcine cirrovirus type 1 and porcine cirque type 2 , among which type 1 is not pathogenic , and type 2 can cause porcine reproductive diseases ( PCVDs ) . In order to prove the above hypothesis , we find that the nuclear localization signal region of the experimental group has a large amount of amino acid arginine with positive charge . In addition to the function of nuclear localization , we find that the nuclear localization signal region of the experimental group has a large amount of amino acid arginine with positive charge .

【學(xué)位授予單位】：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S852.651

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本文編號(hào)：1521880