發(fā)布時間：2018-02-21 00:40

  本文關鍵詞： 綿羊 冷凍 性腺 精卵 CD81　出處：《內蒙古農業(yè)大學》2016年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：卵母細胞冷凍在體外胚胎生產技術的研究中尤為突顯。但在其冷凍過程中,易受到一系列的損傷。隨著分子生物技術的快速發(fā)展,研究人員對卵母細胞冷凍損傷的研究逐步轉向對其分子機制的探討,其中跨膜蛋白的變化有可能引起精卵結合和融合異常。CD9是目前鑒定的唯一精卵融合必須的卵子蛋白,并且有相關報道CD81也參與精卵融合。胞間CD81和CD9互作時形成一個復合體,該復合體很可能在精卵互作時起作用。然而,它們在膜融合中的作用仍不清楚。本研究首次采用免疫熒光染色技術檢測了不同發(fā)育期綿羊卵母細胞凍融前后細胞骨架的變化,CD81在綿羊卵巢組織、睪丸和附睪組織、卵母細胞及精子上的分布；采用實時熒光定量PCR技術,檢測了CD81在不同發(fā)育期凍融前后的綿羊卵母細胞中：mRNA水平的表達量,并比較分析了不同發(fā)育階段CD81基因mRNA水平的表達差異；利用IVF技術,檢測了抗CD81抗體對綿羊精卵結合的影響,及凍融GV期和M Ⅱ期卵母細胞對IVF的影響。本研究得到如下幾點結果：1.冷凍對卵母細胞器及細胞骨架的影響結果表明,冷凍后GV期和M Ⅱ期卵母細胞的形態(tài)正常率顯著低于冷凍前,微絲、微管及核受到不同程度的損傷。說明冷凍保存損傷其結構和細胞骨架,可能影響卵母細胞的后期發(fā)育；2.CD81在綿羊卵巢組織、卵母細胞、睪丸和附睪組織及精子上的表達檢測結果顯示：(1)CD81表達于初級、次級和三級卵泡的卵泡細胞上,并且在卵泡發(fā)育成熟時,其在卵丘細胞、顆粒細胞、基膜、內膜細胞和外膜細胞上均表達；(2)CD81在成熟前后卵母細胞上均有表達,但GV期卵母細胞上CD81主要在卵母細胞膜上表達,而MⅡ期卵母細胞上CD81的表達主要在卵母細胞膜和透明帶上,并且在透明帶上的表達較GV期明顯；(3)CD81在綿羊睪丸曲細精管上皮細胞上表達,靠近管腔基部信號更強。附睪頭、體假復層纖毛柱狀上皮細胞中高柱狀纖毛上皮細胞和游離緣的纖毛中均檢測到CD81陽性信號。附睪體、尾管腔中檢測到CD81陽性信號,且附睪尾管腔內CD81陽性信號明顯。CD81于附睪頭、體、尾部的基細胞層表達,且在附睪體、尾的基細胞層強表達；(4)CD81強表達于精子的頂體部,其余部位均未檢測到CD81蛋白熒光信號；3.CD81在不同發(fā)育階段冷凍的卵母細胞中mRNA表達規(guī)律結果顯示：新鮮MⅡ期卵母細胞中CD81 mRNA表達量顯著高于冷凍MⅡ、新鮮GV和冷凍GV(P0.01),冷凍M Ⅱ顯著高于新鮮GV和冷凍GV(P0.01),新鮮GV與冷凍GV差異不顯著(P0.05);4.抗CD81抗體和超低溫冷凍對精卵結合和融合的影響。卵母細胞與CD81單克隆抗體共孵育處理后的試驗結果顯示：每卵黏附精子數(shù)和精子穿透率分別為實驗組(4.2±0.8,30%)明顯低于對照組(13±1.22,85%),差異均顯著(P0.01)。凍融后GV期卵母細胞對IVF的影響結果顯示：每卵黏附精子數(shù)和精子穿透率分別為實驗組(5.8±0.8,45%)明顯低于對照組(13±1.22,85%),差異均顯著(P0.01)。凍融后M Ⅱ期卵母細胞經IVF后試驗結果顯示：每卵黏附精子數(shù)和精子穿透率分別為實驗組(7.0±1.0,62%)明顯低于對照組(13±1.22,85%),差異均顯著(P0.01)。并且,凍融后M Ⅱ期和GV期卵母細胞經IVF后每卵黏附精子數(shù)和精子穿透率差異顯著(P0.01)。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：內蒙古農業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S826

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