本文關(guān)鍵詞： 綿羊 冷凍 性腺 精卵 CD81　出處：《內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)》2016年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：卵母細(xì)胞冷凍在體外胚胎生產(chǎn)技術(shù)的研究中尤為突顯。但在其冷凍過程中,易受到一系列的損傷。隨著分子生物技術(shù)的快速發(fā)展,研究人員對(duì)卵母細(xì)胞冷凍損傷的研究逐步轉(zhuǎn)向?qū)ζ浞肿訖C(jī)制的探討,其中跨膜蛋白的變化有可能引起精卵結(jié)合和融合異常。CD9是目前鑒定的唯一精卵融合必須的卵子蛋白,并且有相關(guān)報(bào)道CD81也參與精卵融合。胞間CD81和CD9互作時(shí)形成一個(gè)復(fù)合體,該復(fù)合體很可能在精卵互作時(shí)起作用。然而,它們?cè)谀と诤现械淖饔萌圆磺宄�。本研究首次采用免疫熒光染色技術(shù)檢測(cè)了不同發(fā)育期綿羊卵母細(xì)胞凍融前后細(xì)胞骨架的變化,CD81在綿羊卵巢組織、睪丸和附睪組織、卵母細(xì)胞及精子上的分布；采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù),檢測(cè)了CD81在不同發(fā)育期凍融前后的綿羊卵母細(xì)胞中：mRNA水平的表達(dá)量,并比較分析了不同發(fā)育階段CD81基因mRNA水平的表達(dá)差異；利用IVF技術(shù),檢測(cè)了抗CD81抗體對(duì)綿羊精卵結(jié)合的影響,及凍融GV期和M Ⅱ期卵母細(xì)胞對(duì)IVF的影響。本研究得到如下幾點(diǎn)結(jié)果：1.冷凍對(duì)卵母細(xì)胞器及細(xì)胞骨架的影響結(jié)果表明,冷凍后GV期和M Ⅱ期卵母細(xì)胞的形態(tài)正常率顯著低于冷凍前,微絲、微管及核受到不同程度的損傷。說明冷凍保存損傷其結(jié)構(gòu)和細(xì)胞骨架,可能影響卵母細(xì)胞的后期發(fā)育；2.CD81在綿羊卵巢組織、卵母細(xì)胞、睪丸和附睪組織及精子上的表達(dá)檢測(cè)結(jié)果顯示：(1)CD81表達(dá)于初級(jí)、次級(jí)和三級(jí)卵泡的卵泡細(xì)胞上,并且在卵泡發(fā)育成熟時(shí),其在卵丘細(xì)胞、顆粒細(xì)胞、基膜、內(nèi)膜細(xì)胞和外膜細(xì)胞上均表達(dá)；(2)CD81在成熟前后卵母細(xì)胞上均有表達(dá),但GV期卵母細(xì)胞上CD81主要在卵母細(xì)胞膜上表達(dá),而MⅡ期卵母細(xì)胞上CD81的表達(dá)主要在卵母細(xì)胞膜和透明帶上,并且在透明帶上的表達(dá)較GV期明顯；(3)CD81在綿羊睪丸曲細(xì)精管上皮細(xì)胞上表達(dá),靠近管腔基部信號(hào)更強(qiáng)。附睪頭、體假?gòu)?fù)層纖毛柱狀上皮細(xì)胞中高柱狀纖毛上皮細(xì)胞和游離緣的纖毛中均檢測(cè)到CD81陽(yáng)性信號(hào)。附睪體、尾管腔中檢測(cè)到CD81陽(yáng)性信號(hào),且附睪尾管腔內(nèi)CD81陽(yáng)性信號(hào)明顯。CD81于附睪頭、體、尾部的基細(xì)胞層表達(dá),且在附睪體、尾的基細(xì)胞層強(qiáng)表達(dá)；(4)CD81強(qiáng)表達(dá)于精子的頂體部,其余部位均未檢測(cè)到CD81蛋白熒光信號(hào)；3.CD81在不同發(fā)育階段冷凍的卵母細(xì)胞中mRNA表達(dá)規(guī)律結(jié)果顯示：新鮮MⅡ期卵母細(xì)胞中CD81 mRNA表達(dá)量顯著高于冷凍MⅡ、新鮮GV和冷凍GV(P0.01),冷凍M Ⅱ顯著高于新鮮GV和冷凍GV(P0.01),新鮮GV與冷凍GV差異不顯著(P0.05);4.抗CD81抗體和超低溫冷凍對(duì)精卵結(jié)合和融合的影響。卵母細(xì)胞與CD81單克隆抗體共孵育處理后的試驗(yàn)結(jié)果顯示：每卵黏附精子數(shù)和精子穿透率分別為實(shí)驗(yàn)組(4.2±0.8,30%)明顯低于對(duì)照組(13±1.22,85%),差異均顯著(P0.01)。凍融后GV期卵母細(xì)胞對(duì)IVF的影響結(jié)果顯示：每卵黏附精子數(shù)和精子穿透率分別為實(shí)驗(yàn)組(5.8±0.8,45%)明顯低于對(duì)照組(13±1.22,85%),差異均顯著(P0.01)。凍融后M Ⅱ期卵母細(xì)胞經(jīng)IVF后試驗(yàn)結(jié)果顯示：每卵黏附精子數(shù)和精子穿透率分別為實(shí)驗(yàn)組(7.0±1.0,62%)明顯低于對(duì)照組(13±1.22,85%),差異均顯著(P0.01)。并且,凍融后M Ⅱ期和GV期卵母細(xì)胞經(jīng)IVF后每卵黏附精子數(shù)和精子穿透率差異顯著(P0.01)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S826

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本文編號(hào)：1520499