本文關(guān)鍵詞： 豬 IL-基因 真核表達(dá)載體 克隆　出處：《中國(guó)畜牧獸醫(yī)》2017年09期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：為獲得表達(dá)豬白細(xì)胞介素18(interleukin-18,IL-18)的真核表達(dá)重組質(zhì)粒,試驗(yàn)通過(guò)RT-PCR從豬脾臟、肺臟和淋巴結(jié)組織中擴(kuò)增豬IL-18全基因并定向克隆到真核表達(dá)載體pZJ-1,測(cè)序分析和酶切鑒定正確后,轉(zhuǎn)染至293T細(xì)胞中,并通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western blotting分別在基因和蛋白水平檢測(cè)IL-18的表達(dá)。結(jié)果表明,試驗(yàn)成功構(gòu)建了真核表達(dá)重組質(zhì)粒pZJ-IL-18,且可以在293T細(xì)胞中表達(dá)IL-18基因。Western blotting試驗(yàn)證實(shí),豬IL-18多克隆抗體能與約17ku的表達(dá)產(chǎn)物發(fā)生特異性反應(yīng),表明IL-18能正確表達(dá)且具有反應(yīng)原性。本試驗(yàn)構(gòu)建了表達(dá)豬IL-18基因的真核表達(dá)質(zhì)粒,并在293T細(xì)胞中瞬時(shí)表達(dá),為進(jìn)一步研究IL-18的功能奠定基礎(chǔ)。
[Abstract]:In order to obtain the eukaryotic expression plasmid of porcine interleukin-18 interleukin-18hIL-18, porcine IL-18 gene was amplified from pig spleen, lung and lymph nodes by RT-PCR and cloned into eukaryotic expression vector pZJ-1.After sequencing and restriction endonuclease digestion, the recombinant plasmid pZJ-1 was cloned into the eukaryotic expression vector pZJ-1. Transfection into 293T cells and detection of IL-18 expression at gene and protein levels by real-time fluorescence quantitative PCR and Western blotting. The eukaryotic expression plasmid pZJ-IL-18 was successfully constructed, and the IL-18 gene was expressed in 293T cells. Western blotting assay confirmed that porcine IL-18 polyclonal antibody could react specifically with about 17 ku expression product. The eukaryotic expression plasmid expressing porcine IL-18 gene was constructed and expressed in 293T cells, which laid a foundation for further study on the function of IL-18.
【作者單位】： 河南農(nóng)業(yè)大學(xué)牧醫(yī)工程學(xué)院;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(31272567、31772781) 河南省高�？萍紕�(chuàng)新人才支持計(jì)劃(14HASTIT022)
【分類號(hào)】：S858.28

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