本文關(guān)鍵詞： 地衣芽孢桿菌 嗜麥芽窄食單胞菌 二硫鍵還原 角蛋白　出處：《中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院》2015年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：羽毛主要為角蛋白,且富含二硫鍵,較其他類型蛋白質(zhì)更為穩(wěn)定。動物消化道內(nèi)蛋白酶并不能將其水解,限制了羽毛蛋白質(zhì)在畜禽日糧中的應(yīng)用。打開二硫鍵,破壞角蛋白空間結(jié)構(gòu),是提高其利用率的關(guān)鍵。本實(shí)驗(yàn)以高二硫鍵還原能力角蛋白降解菌地衣芽孢桿菌(B.licheniformis)CP-16和嗜麥芽窄食單胞菌(S.maltophilia)10號菌為實(shí)驗(yàn)材料,旨在獲得具有高二硫鍵還原酶活性的酶蛋白,并對其與角蛋白酶協(xié)同作用進(jìn)行研究,探索生物酶解角蛋白的關(guān)鍵酶。B.licheniformis CP-16降解羽毛關(guān)鍵酶蛋白的分離純化。在本實(shí)驗(yàn)室研究的基礎(chǔ)上,利用離子交換層析和分子篩層析分離純化出了新的羽毛降解關(guān)鍵蛋白酶-寡肽酶。研究發(fā)現(xiàn),其可促進(jìn)角蛋白酶水解酪蛋白的水解度,其主要在角蛋白水解后期發(fā)揮作用。具二硫鍵還原能力酶蛋白基因的克隆表達(dá)。利用生物信息學(xué)技術(shù),在Uniprot中搜集到了B.licheniformis和S.maltophilia中有關(guān)二硫鍵還原的五個(gè)酶蛋白核酸序列。根據(jù)該序列設(shè)計(jì)引物,以B.licheniformis CP-16和S.maltophilia 10號菌為實(shí)驗(yàn)材料成功擴(kuò)增出目的基因,并在大腸桿菌中成功表達(dá)純化,分別命名為B-P、S-G、S-T、S-P和S-A。具二硫鍵還原能力重組酶酶學(xué)性質(zhì)及與角蛋白酶水解角蛋白相互關(guān)系研究。研究發(fā)現(xiàn),P-Trx(本實(shí)驗(yàn)室保存)、B-P、S-G、S-T、S-P和S-A等具有二硫鍵還原活性的6種酶的最適p H分別為9.0、9.0、6.0、6.0、8.0和8.0,最適酶促反應(yīng)溫度分別為40℃、40℃、55℃、40℃、45℃和55℃。具二硫鍵還原活性的P-Trx、B-P、S-G、S-T和S-P均可促進(jìn)P-Ker對羽毛角蛋白的水解,其中P-Trx的促進(jìn)率最高,為47%。P-Trx、B-P和S-P二硫鍵還原酶活性均受胰蛋白酶和糜蛋白酶的影響,但對P-Trx的水解作用最小,而糜蛋白酶對B-P的水解作用為100%。同樣重組酶P-Trx和S-P對胰蛋白酶和糜蛋白酶也有一定影響,但均不足10%,這3種重組酶均可促進(jìn)胰蛋白酶和糜蛋白酶對豆粕的水解,其中S-P對胰蛋白酶水解豆粕的促進(jìn)作用最大,達(dá)83%。
[Abstract]:On the basis of the research of this lab , it is found that it can promote the hydrolysis degree of keratin by using ion exchange chromatography and molecular sieve chromatography . The results show that P - Trx , B - P , S - G , S - T , S - P and S - P can promote the hydrolysis of feather keratin . The results show that the promoter of P - Trx , B - P , S - G , S - T and S - P can promote the hydrolysis of keratin .

【學(xué)位授予單位】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S816.3

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1504780