本文關(guān)鍵詞： 原始生殖細胞(PGCs) 無飼養(yǎng)層 PKH 胚胎注射　出處：《農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學報》2017年08期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：原始生殖細胞(primordial germ cells,PGCs)是生殖母細胞的前體細胞,作為一種多能干細胞,具有與胚胎干細胞相似的形態(tài)及分化潛能,能在體外進行培養(yǎng)、傳代,并在一定條件下保持未分化狀態(tài)及多能性�，F(xiàn)階段PGCs的體外培養(yǎng)體系中往往存在飼養(yǎng)層細胞和血清,為后期研究造成了困難和混淆。為建立粵黃雞(Gallus gallus)PGCs的體外無飼養(yǎng)層培養(yǎng)體系。本研究通過改進培養(yǎng)體系成分分離純化PGCs并進行體外培養(yǎng)。結(jié)果顯示,所得無飼養(yǎng)層培養(yǎng)的PGCs直徑為6~8μm,生長曲線呈現(xiàn)"S"形,群體倍增時間(3.75±0.15)d,結(jié)果表明,PGCs具有良好的增殖生長狀態(tài);對分離純化的PGCs特異性基因胚胎階段特異性表面抗原(stage specific embryonic antigen-1,SSEA-1)和類無精癥缺失基因(deleted in azoospermia-like,DAZL)進行免疫熒光鑒定,結(jié)果顯示二者在PGCs均有表達,經(jīng)化學免疫染色的細胞可觀察到綠色的熒光;將無飼養(yǎng)層培養(yǎng)的PGCs用PKH26標記,注射到孵化至17~20期受體雞胚的背主動脈中,繼續(xù)孵化至第5.5天,結(jié)果顯示,分離純化并通過PKH26標記的雞胚血液PGCs仍然具有PGCs的特性,可隨雞胚的血液循環(huán)定殖于雞胚性腺中。本研究優(yōu)化了PGCs體外培養(yǎng)的條件,建立無飼養(yǎng)層無血清培養(yǎng)體系,為家禽PGCs應用于現(xiàn)代保種技術(shù)、轉(zhuǎn)基因技術(shù)以及家禽的發(fā)育生物學等研究領(lǐng)域提供了重要的技術(shù)支持。
[Abstract]:Primordial germ cells (PGCs) are progenitor cells of reproductive mother cells, which are multipotent stem cells. It has similar morphological and differentiation potential to embryonic stem cells and can be cultured and subcultured in vitro. Under certain conditions undifferentiated state and pluripotency were maintained. Feeder layer cells and serum were often found in the present culture system of PGCs in vitro. In order to establish Gallus gallus of Yuehuang Chicken, it is difficult and confusing for the later study. PGCs culture system without feeder layer in vitro. In this study, PGCs was isolated and purified by improved culture system and cultured in vitro. The results showed that. The diameter of PGCs was 6 渭 m, the growth curve was "S" shape, and the population doubling time was 3.75 鹵0.15 days. The results showed that the growth curve was of "S" shape and the population doubling time was 3.75 鹵0.15 days. PGCs had good proliferation and growth state. The stage specific embryonic antigen-1 of PGCs specific gene was isolated and purified. SSEA-1) and deleted in azoospermia-like DAZL) were identified by immunofluorescence. The results showed that both of them were expressed in PGCs, and green fluorescence could be observed in chemically stained cells. The cultured PGCs was labeled with PKH26 and incubated into the dorsal aorta of the 170-stage recipient chicken embryo and incubated to 5.5d. The chicken embryo blood PGCs, which was isolated and purified by PKH26, still has the characteristics of PGCs. The blood circulation of chicken embryo can be colonized in the gonad of chicken embryo. This study optimized the condition of PGCs culture in vitro and established a serum-free culture system without feeding layer. Transgenic technology and poultry developmental biology provide important technical support.
【作者單位】： 佛山科學技術(shù)學院生命科學與工程學院;
【基金】：國家自然科學基金(No.31201871)
【分類號】：S831
【正文快照】： 原始生殖細胞(primordial germ cells,PGCs)是各級生殖細胞的祖細胞,同時也是能夠發(fā)育成精子和卵母細胞的干細胞。PGCs首先在雞(Gallusgallus)胚的生殖腺中發(fā)現(xiàn),在體外適宜培養(yǎng)條件下,其形態(tài)、表面標志和分化潛能均類似于胚胎干細胞(embryonic stem cells,ES)細胞(Matsui et a

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本文編號：1459092