本文關(guān)鍵詞： 牛輪狀病毒 VP基因 實(shí)時(shí)熒光定量PCR　出處：《中國(guó)獸醫(yī)科學(xué)》2017年06期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：為建立快速特異的定量檢測(cè)牛輪狀病毒的熒光定量PCR方法,本研究從牛輪狀病毒NCDV株DNA中擴(kuò)增的VP6基因片段(211 bp)并克隆于pMD19-T載體(p MD19-T-VP6)作為重組質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品,建立了SYBR Green I熒光定量PCR檢測(cè)方法。結(jié)果表明,VP6片段長(zhǎng)211 bp,經(jīng)鑒定所構(gòu)建的重組質(zhì)粒成功;用該質(zhì)粒測(cè)得real-time PCR的最低檢測(cè)量為15.39 copies/L。用該方法檢測(cè)豬傳染性胃腸炎病毒、牛細(xì)小病毒、豬流行性腹瀉病毒及偽狂犬病病毒的結(jié)果均為陰性,表明其具有良好的特異性。重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果表明,批內(nèi)和批間重復(fù)變異系數(shù)均小于3%,表明該方法具有良好的重復(fù)性。以上結(jié)果表明,本研究建立的基于VP6基因的牛輪狀病毒qRT-PCR檢測(cè)方法具有特異、靈敏、快速等特點(diǎn),可用于牛輪狀病毒的早期診斷。
[Abstract]:To establish a rapid and specific PCR method for quantitative detection of bovine rotavirus. In this study, the fragment of VP6 gene from bovine rotavirus NCDV strain DNA was amplified and cloned into pMD19-T vector pMD19-T-VP6. As a recombinant plasmid standard. A fluorescence quantitative PCR assay for SYBR Green I was established. The results showed that the fragment length of VP6 was 211bp. the recombinant plasmid was identified successfully. The lowest detection of real-time PCR by this plasmid was 15.39 copias / L. The method was used to detect porcine infectious gastroenteritis virus and bovine parvovirus. The results of porcine epidemic diarrhea virus and pseudorabies virus were negative, which indicated that they had good specificity. The repeatability test showed that the coefficient of variation was less than 3%. The results showed that the qRT-PCR detection method based on VP6 gene was specific, sensitive and rapid. It can be used for the early diagnosis of bovine rotavirus.
【作者單位】： 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院;黑龍江省疾病控制中心;
【基金】：“十三五”國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目(2016YFD0500904)
【分類號(hào)】：S852.653
【正文快照】： 牛輪狀病毒(bovine rotaviens,BRV),屬于呼腸孤病毒科(reoviridae)輪狀病毒屬(rotavirus)成員。牛輪狀病毒感染多發(fā)生在15~45日齡的犢牛,其臨床癥狀表現(xiàn)為精神沉郁、食欲廢絕、腹瀉和脫水[1-2]。Corresponding author:QIAO Xin-yuan,E-mail:qiaoxinyuan@126.com輪狀病毒粒子核

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本文編號(hào)：1455660