本文關(guān)鍵詞： αMSH MC5R拮抗劑 3T3-L1脂肪細(xì)胞 細(xì)胞凋亡 細(xì)胞炎癥　出處：《西北農(nóng)林科技大學(xué)》2015年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：αMSH是由下丘腦分泌的一種神經(jīng)內(nèi)分泌激素,可調(diào)控MC5R受體分子的表達(dá),進(jìn)而介導(dǎo)脂肪細(xì)胞分化及脂代謝等諸多生理過程。研究表明,αMSH可通過MC5R抑制巨噬細(xì)胞、C2C12成肌細(xì)胞的凋亡,抑制細(xì)胞炎癥因子的表達(dá),由此推測αMSH可能對脂肪細(xì)胞凋亡和炎癥有影響,但其具體作用機(jī)理仍不清楚。近年來對MC5R研究主要側(cè)重在脂肪細(xì)胞分化和代謝調(diào)控等方面,并篩選了MC5R的特異性拮抗劑JNJ10229570,但MC5R在脂肪細(xì)胞凋亡和炎癥方面的作用尚未見報(bào)道。本研究在構(gòu)建棕櫚酸誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡模型和脂多糖處理的炎癥模型的基礎(chǔ)上,探討αMSH通過MC5R調(diào)控脂肪細(xì)胞凋亡和炎癥的具體作用及其機(jī)制,其結(jié)果為進(jìn)一步揭示MC5R在脂肪細(xì)胞中的作用機(jī)制以及通過MC5R防治肥胖等相關(guān)疾病提供理論依據(jù)。本試驗(yàn)獲得如下結(jié)果:1.本試驗(yàn)證實(shí)一定濃度的αMSH對3T3-L1脂肪細(xì)胞無毒害作用,濃度為300nM、500 nM、700 nM和900 nM的αMSH使MC5R的mRNA表達(dá)水平顯著提高(P0.05);0.8μM的MC5R特異性拮抗劑JNJ10229570能使MC5R表達(dá)水平顯著降低(P0.05)。0.2mM的棕櫚酸鹽作用脂肪細(xì)胞24h后,細(xì)胞存活率達(dá)到78%,為細(xì)胞最佳處理時(shí)間。油紅O和Bodipy染色的結(jié)果表明,在3T3-L1脂肪細(xì)胞中,αMSH可促進(jìn)脂滴沉積;相反,MC5R拮抗劑可抑制脂肪細(xì)胞中脂滴的沉積。2.利用棕櫚酸鹽構(gòu)建3T3-L1脂肪細(xì)胞凋亡模型,結(jié)合Hoechst 33258染色和Annexin V-FITC/PI染色流式細(xì)胞儀檢測,結(jié)果表明,αMSH顯著減少細(xì)胞凋亡數(shù)量(P0.05),棕櫚酸鹽和αMSH共處理組細(xì)胞凋亡數(shù)介于單獨(dú)的αMSH組和棕櫚酸鹽組之間(P0.05);而MC5R拮抗劑則與αMSH作用相反。RT-PCR和Western Blotting檢測細(xì)胞凋亡相關(guān)基因發(fā)現(xiàn),αMSH組中抑凋亡因子Bcl-2的表達(dá)量顯著上升,促凋亡因子Bax的表達(dá)量顯著下降,cleaved Caspase-9,cleaved Caspase-3活性極顯著降低(P0.05),單獨(dú)的棕櫚酸鹽誘導(dǎo)組促凋亡因子Bax的表達(dá)量顯著上升,抑凋亡因子Bcl-2的表達(dá)量顯著下降,cleaved Caspase-9,cleaved Caspase-3活性極顯著增強(qiáng)(P0.05),棕櫚酸和αMSH共處理組凋亡因子的表達(dá)水平則處于單獨(dú)的αMSH組和棕櫚酸鹽組之間(P0.05);MC5R拮抗劑可顯著增加棕櫚酸鹽誘導(dǎo)的凋亡因子Bax、cleaved Caspase-9,cleaved Caspase-3的表達(dá)水平(P0.05)。3.構(gòu)建脂多糖處理的3T3-L1脂肪細(xì)胞炎癥模型,在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平上檢測炎癥因子的變化情況。MTT檢測細(xì)胞活率表明,LPS最佳處理濃度是1μg/mL。αMSH能夠顯著抑制IL-1β、IL-6和MCP-1的表達(dá)(P0.05);MC5R拮抗劑顯著增加炎性因子IL-1β、IL-6和MCP-1的表達(dá)(P0.05),與空白對照組相比,二者對TNF-α的表達(dá)有作用,但差異不顯著。4.對JNK信號通路的研究結(jié)果表明,αMSH抑制JNK磷酸化水平;MC5R拮抗劑可提高JNK磷酸化水平(P0.05)。加入JNK抑制劑(SP600125),JNK及其下游c-Jun磷酸化表達(dá)水平下降(P0.05)。以上結(jié)果表明:αMSH可通過MC5R抑制3T3-L1脂肪細(xì)胞凋亡,降低促炎性細(xì)胞因子表達(dá)水平;而MC5R拮抗劑能促進(jìn)脂肪細(xì)胞凋亡和炎癥反應(yīng);且JNK信號通路參與調(diào)控3T3-L1脂肪細(xì)胞凋亡和炎癥。
[Abstract]:The results showed that 偽MSH could inhibit the apoptosis and inflammation of 3T3 - L1 adipocytes . The results showed that 偽MSH could inhibit the apoptosis and inflammation of 3T3 - L1 adipocytes . The levels of IL - 1尾 , IL - 6 and MCP - 1 in 3T3 - L1 adipocytes were significantly inhibited by MC5R antagonist ( P0.05 ) .

【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S852.3

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本文編號：1454173