發(fā)布時間：2018-01-22 08:09

  本文關鍵詞： αMSH MC5R拮抗劑 3T3-L1脂肪細胞 細胞凋亡 細胞炎癥　出處：《西北農(nóng)林科技大學》2015年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：αMSH是由下丘腦分泌的一種神經(jīng)內(nèi)分泌激素,可調(diào)控MC5R受體分子的表達,進而介導脂肪細胞分化及脂代謝等諸多生理過程。研究表明,αMSH可通過MC5R抑制巨噬細胞、C2C12成肌細胞的凋亡,抑制細胞炎癥因子的表達,由此推測αMSH可能對脂肪細胞凋亡和炎癥有影響,但其具體作用機理仍不清楚。近年來對MC5R研究主要側重在脂肪細胞分化和代謝調(diào)控等方面,并篩選了MC5R的特異性拮抗劑JNJ10229570,但MC5R在脂肪細胞凋亡和炎癥方面的作用尚未見報道。本研究在構建棕櫚酸誘導的細胞凋亡模型和脂多糖處理的炎癥模型的基礎上,探討αMSH通過MC5R調(diào)控脂肪細胞凋亡和炎癥的具體作用及其機制,其結果為進一步揭示MC5R在脂肪細胞中的作用機制以及通過MC5R防治肥胖等相關疾病提供理論依據(jù)。本試驗獲得如下結果:1.本試驗證實一定濃度的αMSH對3T3-L1脂肪細胞無毒害作用,濃度為300nM、500 nM、700 nM和900 nM的αMSH使MC5R的mRNA表達水平顯著提高(P0.05);0.8μM的MC5R特異性拮抗劑JNJ10229570能使MC5R表達水平顯著降低(P0.05)。0.2mM的棕櫚酸鹽作用脂肪細胞24h后,細胞存活率達到78%,為細胞最佳處理時間。油紅O和Bodipy染色的結果表明,在3T3-L1脂肪細胞中,αMSH可促進脂滴沉積;相反,MC5R拮抗劑可抑制脂肪細胞中脂滴的沉積。2.利用棕櫚酸鹽構建3T3-L1脂肪細胞凋亡模型,結合Hoechst 33258染色和Annexin V-FITC/PI染色流式細胞儀檢測,結果表明,αMSH顯著減少細胞凋亡數(shù)量(P0.05),棕櫚酸鹽和αMSH共處理組細胞凋亡數(shù)介于單獨的αMSH組和棕櫚酸鹽組之間(P0.05);而MC5R拮抗劑則與αMSH作用相反。RT-PCR和Western Blotting檢測細胞凋亡相關基因發(fā)現(xiàn),αMSH組中抑凋亡因子Bcl-2的表達量顯著上升,促凋亡因子Bax的表達量顯著下降,cleaved Caspase-9,cleaved Caspase-3活性極顯著降低(P0.05),單獨的棕櫚酸鹽誘導組促凋亡因子Bax的表達量顯著上升,抑凋亡因子Bcl-2的表達量顯著下降,cleaved Caspase-9,cleaved Caspase-3活性極顯著增強(P0.05),棕櫚酸和αMSH共處理組凋亡因子的表達水平則處于單獨的αMSH組和棕櫚酸鹽組之間(P0.05);MC5R拮抗劑可顯著增加棕櫚酸鹽誘導的凋亡因子Bax、cleaved Caspase-9,cleaved Caspase-3的表達水平(P0.05)。3.構建脂多糖處理的3T3-L1脂肪細胞炎癥模型,在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平上檢測炎癥因子的變化情況。MTT檢測細胞活率表明,LPS最佳處理濃度是1μg/mL。αMSH能夠顯著抑制IL-1β、IL-6和MCP-1的表達(P0.05);MC5R拮抗劑顯著增加炎性因子IL-1β、IL-6和MCP-1的表達(P0.05),與空白對照組相比,二者對TNF-α的表達有作用,但差異不顯著。4.對JNK信號通路的研究結果表明,αMSH抑制JNK磷酸化水平;MC5R拮抗劑可提高JNK磷酸化水平(P0.05)。加入JNK抑制劑(SP600125),JNK及其下游c-Jun磷酸化表達水平下降(P0.05)。以上結果表明:αMSH可通過MC5R抑制3T3-L1脂肪細胞凋亡,降低促炎性細胞因子表達水平;而MC5R拮抗劑能促進脂肪細胞凋亡和炎癥反應;且JNK信號通路參與調(diào)控3T3-L1脂肪細胞凋亡和炎癥。
[Abstract]:The results showed that 偽MSH could inhibit the apoptosis and inflammation of 3T3 - L1 adipocytes . The results showed that 偽MSH could inhibit the apoptosis and inflammation of 3T3 - L1 adipocytes . The levels of IL - 1尾 , IL - 6 and MCP - 1 in 3T3 - L1 adipocytes were significantly inhibited by MC5R antagonist ( P0.05 ) .

【學位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：S852.3

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