發(fā)布時(shí)間：2018-01-21 20:37

  本文關(guān)鍵詞： 雞馬立克氏病病毒 肉種雞 產(chǎn)蛋高峰期 標(biāo)準(zhǔn)抗原 標(biāo)準(zhǔn)血清　出處：《揚(yáng)州大學(xué)》2016年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：雞馬立克氏病(Marek's disease, MD)由皰疹病毒科的馬立克氏病病毒引起,1907年Josef Marek首次報(bào)道,主要引起各種臟器、皮膚的淋巴單核細(xì)胞浸潤(rùn),通常于10-12周齡發(fā)病,可造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。本研究以瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn),間接免疫熒光、病毒分離鑒定等方法,結(jié)合病理切片結(jié)果,在排除REV和ALV感染的基礎(chǔ)上,對(duì)250日齡已免疫馬立克疫苗肉種雞雞群中的腫瘤病原進(jìn)行了鑒定。同時(shí)本研究參考OIE官方公布的MDV瓊擴(kuò)抗原制備方法,經(jīng)改進(jìn)制備出MDV標(biāo)準(zhǔn)抗原、標(biāo)準(zhǔn)血清,為MDV的診斷防治以及診斷試劑的標(biāo)定提供了有效的方法和材料。1.肉種雞產(chǎn)蛋高峰期馬立克氏病的鑒定雞馬立克氏病通常于10-12周齡發(fā)病,由馬立克氏病病毒引起。本研究以瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn),間接免疫熒光試驗(yàn)、病毒分離鑒定等方法,結(jié)合病理切片結(jié)果,在排除REV和ALV感染的基礎(chǔ)上,診斷出250日齡已免疫馬立克病疫苗肉種雞雞群的馬立克氏病,并且成功分離到一株馬立克氏病病毒,命名為MDV-AH1410。對(duì)其meq和gB基因進(jìn)行PCR檢測(cè)和序列分析,結(jié)果顯示分離株與MDV Ⅰ型強(qiáng)毒及超強(qiáng)毒株的同源性為99.3%～100%,具有強(qiáng)毒特征。研究表明,雞馬立克氏病病毒不僅毒性在逐漸增強(qiáng),而且雞群發(fā)病的時(shí)間段也在延伸。2.馬立克氏病病毒標(biāo)準(zhǔn)抗原、標(biāo)準(zhǔn)血清的研制選取MDV國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)毒株RB1B作為候選毒株,用有限稀釋法純化病毒,將純化好的病毒通過(guò)PCR的方法進(jìn)行了純異性分析,參考OIE公布的MDV瓊擴(kuò)抗原的制備方法經(jīng)改進(jìn)研制出MDV瓊擴(kuò)標(biāo)準(zhǔn)抗原,對(duì)其進(jìn)行特異性分析以及瓊擴(kuò)效價(jià)測(cè)定。結(jié)果表明純化的MDV-RBIB病毒無(wú)CAV、ALV、REV、EDS-76V、GPV、IBV、ILTV、IBDV等外源病毒,制得的瓊擴(kuò)抗原只與MDV陽(yáng)性血清反應(yīng),與其他相關(guān)血清沒(méi)有交叉反應(yīng),瓊擴(kuò)抗原效價(jià)為1：4。用1日齡SPF雞腹腔注射MDV-RBIB毒株2000PFU/羽,每周采血血分離血清進(jìn)行抗體檢測(cè),待瓊擴(kuò)試驗(yàn)陽(yáng)性后無(wú)菌采血,通過(guò)間接免疫熒光和血凝抑制等方法進(jìn)行純異性分析,同時(shí)檢測(cè)其熒光效價(jià)和瓊擴(kuò)效價(jià)。間接免疫熒光試驗(yàn)結(jié)果顯示該制得的抗MDV血清不與ALV、GPV、REV、IBV、IBDV、NDV、AIV、EDS-76V等外源病毒反應(yīng),只與MDV反應(yīng),熒光效價(jià)為1：1600,瓊擴(kuò)抗體效價(jià)為1：4。制備的瓊擴(kuò)抗原加入1%的BSA,制備的多抗血清加入0.01%硫柳汞,分別凍干分裝。按照中國(guó)獸藥典進(jìn)行無(wú)菌檢驗(yàn)、支原體檢驗(yàn)合格；檢查分裝差異系數(shù)CV值、物理性狀、穩(wěn)定性、均一性、保質(zhì)期等均符合要求,最后獲得了高質(zhì)量的MDV標(biāo)準(zhǔn)抗原和標(biāo)準(zhǔn)血清,為MDV的診斷防治以及診斷試劑的標(biāo)定提供了有效的方法和材料。
[Abstract]:Marek's disease (Marek's, disease, MD) caused by Marek's disease virus, herpes simplex virus, first reported in 1907, Josef Marek, is mainly caused by the various organs, skin, lymph and mononuclear cell infiltration, usually in the pathogenesis of 10-12 weeks of age, can cause severe economic loss. This study by agar diffusion test, indirect immunofluorescence virus isolation and identification, and other methods, combined with the pathological results, excluding the foundation of REV and ALV infection, 250 days of age has been immune vaccine tumor pathogenic Marek broiler breeder chickens were identified. At the same time this study reference OIE official MDV AGP antigen preparation method, improved the preparation of MDV the standard antigen and standard serum for the diagnosis of MDV control and calibration of diagnostic reagents provides effective methods and materials of.1. broiler breeder egg peak of Marek's disease and identification of chicken Marek's disease usually in 10-12 weeks. The disease, caused by Marek's disease virus. This study by agar diffusion test, indirect immunofluorescence test, virus isolation and identification methods, combined with the pathological results, excluding the foundation of REV and ALV infection, diagnosed at the age of 250 days has been immune to Marek's disease Marek's disease vaccine broiler chickens, and successfully isolated a strain of Marek's disease virus, named MDV-AH1410. was analyzed by PCR detection and sequence of the meq gene and gB gene showed 99.3% homology to 100% isolates with MDV type virulent and very virulent, with strong toxic characteristics. The results show that not only the toxicity of chicken Marek's disease virus in gradually increased. Time and the incidence of chickens is also an extension of Marek's disease virus.2. standard antigen and standard serum development selection of international standard MDV strain RB1B as candidate strains, purification of the virus by limited dilution, the purified virus The pure specific analysis by PCR method, preparation method of reference OIE released MDV AGP antigen and improved the development of MDV standard AGP antigen, carries on the analysis and determination of specific AGP titer. The results showed that the purified MDV-RBIB virus CAV, ALV, REV, EDS-76V, GPV, IBV, ILTV IBDV, exogenous virus, AGP antigen prepared only reacted with MDV positive serum, no cross reaction with other serum AGP antigen titer was 1:4. with 1 day old SPF chickens were intraperitoneally injected with MDV-RBIB strain 2000PFU/ plume, weekly blood separation serum antibody detection, the AGP test positive after sterile blood. Pure were analyzed by indirect immunofluorescence and hemagglutination inhibition method, and detecting the fluorescence titer and AGP titer. Indirect immunofluorescence assay showed that the prepared anti MDV serum and ALV, GPV, REV, IBV, IBDV, NDV, AIV, EDS-76V etc. The source of the virus, only reacted with MDV, fluorescent titer of 1:1600 antibody titer, AGP AGP antigen 1:4. were prepared by adding 1% BSA, preparation of polyclonal sera with 0.01% thimerosal, respectively. Aseptic freeze-dried packing inspection according to Chinese Veterinary Pharmacopoeia, Mycoplasma inspection; check the quantity difference coefficient CV, physical properties, stability, uniformity, shelf life and so on are in line with the requirements, finally get the high quality MDV standard antigen and standard serum for the diagnosis of MDV control and calibration of diagnostic reagent provides effective method and material.

【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S858.31

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 凌宇;;腦部的馬立克氏病引發(fā)暫時(shí)性癱瘓[J];養(yǎng)禽與禽病防治;1984年04期

2 周文平;;含疫苗火雞皰疹病毒DNA的雞羽尖中馬立克氏病病毒的復(fù)制[J];廣東畜牧獸醫(yī)科技;1992年02期

3 崔治中;用非放射性DNA探針從感染雞羽囊中檢出Ⅰ型馬立克氏病病毒[J];中國(guó)獸醫(yī)科技;1992年09期

4 韓文瑜,黎誠(chéng)耀,梁煥春,王世若,徐宜為,李建偉,楊建德;馬立克氏病病毒抗獨(dú)特型單克隆抗體的研究[J];中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào);1994年03期

5 ;有頑強(qiáng)存活力的馬立克氏病病毒[J];國(guó)外畜牧學(xué)(豬與禽);1996年02期

6 陳少鶯,程由銓;新病理型馬立克氏病病毒的特性[J];福建畜牧獸醫(yī);1998年04期

7 李桂芬;新病理型馬立克氏病病毒的特性[J];畜牧獸醫(yī)科技信息;1998年20期

8 穆楊,張彥明;馬立克氏病病毒的蛋白和疫苗研究進(jìn)展[J];動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2000年03期

9 張錦華;馬立克氏病病毒的分子生物學(xué)研究進(jìn)展[J];江西畜牧獸醫(yī)雜志;2000年03期

10 張?chǎng)斡?秦愛(ài)建;馬立克氏病病毒編碼的類白細(xì)胞介素8研究進(jìn)展[J];中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào);2003年03期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 陳瑞愛(ài);丁家波;王賓;徐家華;同戈;;馬立克氏病病毒疫苗的研究進(jìn)展[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)生物制品學(xué)分會(huì)中國(guó)微生物學(xué)會(huì)獸醫(yī)微生物學(xué)專業(yè)委員會(huì)2010年學(xué)術(shù)年會(huì)（第三屆中國(guó)獸藥大會(huì)學(xué)術(shù)論壇）論文集[C];2010年

2 李晶梅;劉長(zhǎng)軍;張艷萍;施維松;曲鵬;劉愛(ài)玲;閆福海;;雞馬立克氏病病毒在雞淋巴細(xì)胞和羽髓中的復(fù)制動(dòng)力學(xué)分析[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)畜牧獸醫(yī)生物技術(shù)學(xué)分會(huì)暨中國(guó)免疫學(xué)會(huì)獸醫(yī)免疫分會(huì)第七次研討會(huì)論文集[C];2008年

3 何倩倪;鐘旗;吐?tīng)柡榻?趙兵;李金貴;馬迎東;;雞馬立克氏病病毒抗獨(dú)特型抗體的研制[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜傳染病學(xué)分會(huì)成立20周年慶典暨第十次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集（下）[C];2003年

4 錢鶯娟;張雪蓮;陳德勝;陳溥言;;不同方式表達(dá)馬立克氏病病毒糖蛋白B重組雞痘病毒轉(zhuǎn)移質(zhì)粒載體的構(gòu)建[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)禽病學(xué)分會(huì)第十一次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2002年

5 祁保民;姚金水;陳文列;盧惠明;;馬立克氏病病毒人工感染雞細(xì)胞凋亡病變及凋亡機(jī)制研究[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)2004學(xué)術(shù)年會(huì)暨第五屆全國(guó)畜牧獸醫(yī)青年科技工作者學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集（上冊(cè)）[C];2004年

6 盧軍;胡傳偉;劉文博;高崧;彭大新;張如寬;劉秀梵;;表達(dá)雞馬立克氏病病毒糖蛋白B基因重組雞痘病毒的遺傳穩(wěn)定性及生物安全性評(píng)價(jià)試驗(yàn)[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜傳染病學(xué)分會(huì)成立20周年慶典暨第十次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集（下）[C];2003年

7 劉紅梅;秦愛(ài)建;葉建強(qiáng);陳鴻軍;金文杰;劉岳龍;;重組馬立克氏病病毒CVI988/Rispens的構(gòu)建[A];第六屆全國(guó)會(huì)員代表大學(xué)暨第11次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集（下）[C];2005年

8 劉紅梅;秦愛(ài)建;葉建強(qiáng);陳鴻軍;金文杰;劉岳龍;;重組馬立克氏病病毒CVI988/Rispens的構(gòu)建[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜傳染病學(xué)分會(huì)第六屆全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)暨第11次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2005年

9 高巍;秦愛(ài)建;金文杰;邵紅霞;;馬立克氏病病毒vIL8啟動(dòng)子的克隆及其轉(zhuǎn)錄活性[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物傳染病學(xué)分會(huì)第十二次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2007年

10 秦愛(ài)建;盧占軍;陳欣虹;錢錕;金文杰;邵紅霞;王友;;感染馬立克氏病病毒SPF雞法氏囊蛋白質(zhì)組學(xué)研究[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜傳染病學(xué)分會(huì)第七屆全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)暨第十三次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集（上冊(cè)）[C];2009年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前1條

1 北京海正興潮生物技術(shù)有限公司 周海云;為什么家禽打了疫苗還得��？[N];中國(guó)畜牧獸醫(yī)報(bào);2014年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 趙樸;馬立克氏病病毒miRNA的體內(nèi)動(dòng)態(tài)表達(dá)譜及對(duì)病毒基因的自我調(diào)控[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2016年

2 韋平;馬立克氏病病毒meq基因功能的研究[D];揚(yáng)州大學(xué);2002年

3 盧占軍;感染馬立克氏病病毒SPF雞法氏囊蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D];揚(yáng)州大學(xué);2009年

4 陳志琳;表達(dá)馬立克氏病病毒gl基因重組雞痘病毒的構(gòu)建及其免疫保護(hù)作用[D];揚(yáng)州大學(xué);2002年

5 遲佳琦;Mdv1-miR-M4-5p調(diào)控馬立克氏病病毒（MDV）致瘤機(jī)制的初步研究[D];吉林大學(xué);2015年

6 姜世金;Ⅰ型馬立克氏病病毒pp38和pp24基因的表達(dá)及序列測(cè)定與分析[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué);2003年

7 李延鵬;馬立克氏病病毒meq基因缺失株生物學(xué)特性及其免疫效果研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2010年

8 韓凌霞;馬立克氏病病毒gB、gI、pp38基因的原核系統(tǒng)表達(dá)及其特異性單抗的研制和初步應(yīng)用[D];揚(yáng)州大學(xué);2001年

9 張雪蓮;表達(dá)血清1、3型馬立克氏病病毒gB主要抗原表位的重組CVI988病毒構(gòu)建及其免疫保護(hù)作用[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2003年

10 徐明;馬立克氏病病毒誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答基因表達(dá)譜及miRNA對(duì)腫瘤發(fā)生的調(diào)節(jié)作用[D];吉林大學(xué);2011年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 王錦;丹參酮ⅡA磺酸鈉對(duì)馬立克氏病病毒（MDV）復(fù)制機(jī)制的影響[D];山西農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

2 張芙壽;表達(dá)H5N2亞型禽流感病毒HA抗原重組馬立克氏病病毒的構(gòu)建[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

3 宿靖?jìng)?2011-2014年河南省雞群馬立克氏病病毒流行株的分子進(jìn)化及基因重組分析[D];河南農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

4 莊新宇;肉種雞產(chǎn)蛋高峰期的馬立克氏病鑒定及馬立克氏病病毒標(biāo)準(zhǔn)抗原、標(biāo)準(zhǔn)血清的研制[D];揚(yáng)州大學(xué);2016年

5 劉長(zhǎng)軍;表達(dá)馬立克氏病病毒糖蛋白B基因的重組火雞皰疹病毒的構(gòu)建[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2000年

6 張?chǎng)斡?馬立克氏病病毒類白細(xì)胞介素8基因表達(dá)及生物學(xué)特性研究[D];揚(yáng)州大學(xué);2003年

7 崔紅玉;雞馬立克氏病病毒細(xì)菌人工染色體的構(gòu)建[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2007年

8 張曉巍;表達(dá)綠熒光蛋白的重組馬立克氏病病毒814株的構(gòu)建[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2007年

9 宋翠萍;抗馬立克氏病病毒VP22蛋白單克隆抗體的研制及應(yīng)用[D];揚(yáng)州大學(xué);2006年

10 李舜曦;抗馬立克氏病病毒UL13蛋白單克隆抗體的研制及其初步應(yīng)用[D];揚(yáng)州大學(xué);2011年

，

本文編號(hào)：1452509