本文關(guān)鍵詞：馬流感病毒反向遺傳系統(tǒng)的構(gòu)建　出處：《華南農(nóng)業(yè)大學(xué)》2016年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 馬流感病毒 反向遺傳系統(tǒng) 病毒拯救

【摘要】：馬流行性感冒是由馬流感病毒引起的馬屬動物的一種急性呼吸道傳染病,世界動物衛(wèi)生組織將馬流感列為法定報告動物疫情之一。馬流感的爆發(fā)曾對我國的養(yǎng)馬業(yè)及賽馬業(yè)造成沉重的經(jīng)濟打擊,因此針對馬流感病毒的基礎(chǔ)研究一直是病毒學(xué)領(lǐng)域研究的重點。本研究以最早分離得到的H3N8亞型馬流感毒株A/equine/Miami/1/1963(H3N8)為親本,通過RNA抽提、反轉(zhuǎn)錄及PCR技術(shù)對流感病毒8條基因片段進(jìn)行擴增,將擴增后的基因片段同pHW2000雙向表達(dá)載體連接,最終得到了8個含有流感病毒不同基因片段的重組質(zhì)粒,完成了馬流感病毒反向遺傳系統(tǒng)的構(gòu)建。將構(gòu)建好的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,收獲的細(xì)胞上清接種MDCK細(xì)胞繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng),最終拯救出具有感染活性的病毒粒子rH3N8。對拯救出的rH3N8毒株進(jìn)行基因序列測定,結(jié)果顯示其各條基因片段的序列均與親本毒株A/equine/Miami/1/1963(H3N8)相同。rH3N8毒株的血凝測定結(jié)果、TCID50測定結(jié)果及病毒生長曲線結(jié)果也均與親本毒株相似。在構(gòu)建好的馬流感病毒反向遺傳系統(tǒng)的基礎(chǔ)上,以近年本實驗室分離馬流感毒株A/equine/Heilongjiang/SS1/2013(H3N8)為親本,通過RNA抽提、反轉(zhuǎn)錄及PCR技術(shù)對毒株的聚合酶蛋白基因進(jìn)行了擴增,連接pHW2000雙向表達(dá)載體,使用構(gòu)建好的質(zhì)粒對A/equine/Miami/1/1963(H3N8)毒株的聚合酶蛋白基因NP、PA、PB1及PB2進(jìn)行了替換,質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞后拯救出了聚合酶蛋白替換重組病毒tH3N8。t H3N8毒株的測序結(jié)果顯示其基因序列同質(zhì)粒所攜帶序列相同。tH3N8毒株的血凝試驗結(jié)果顯示,其效價變化速率及同期血凝效價結(jié)果均高于rH3N8毒株。TCID50結(jié)果及病毒生長曲線結(jié)果也均反映出tH3N8毒株比rH3N8毒株在MDCK細(xì)胞上具有更快的病毒復(fù)制速度。上述結(jié)果暗示著A/equine/Heilongjiang/SS1/2013(H3N8)毒株的聚合酶蛋白相對A/equine/Miami/1/1963(H3N8)毒株在MDCK細(xì)胞上具有更高的適應(yīng)性。本研究中反向遺傳系統(tǒng)的成功構(gòu)建及重組病毒的成功拯救,為之后馬流感病毒的研究奠定了基礎(chǔ),同時也為馬流感基因工程疫苗的篩選建立了平臺。
[Abstract]:A recombinant plasmid containing influenza virus was amplified by RNA extraction , reverse transcription and polymerase chain reaction ( PCR ) .

【學(xué)位授予單位】：華南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S852.65

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 楊建德,薛飛,王曉鈞,朱遠(yuǎn)茂,趙立平,呂曉玲,沈榮顯,相文華,李景鵬;馬流感病毒(A/equine/Qinghai/1/94)核蛋白基因的序列測定及同源性分析[J];中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報;2003年02期

2 蔣桃珍;劉月煥;林健;韓春華;潘潔;賴平安;韋海濤;�？〗�;趙景義;馬志軍;畢丁仁;;2007年華北地區(qū)H3N8亞型馬流感病毒的分離與鑒定[J];中國獸醫(yī)學(xué)報;2010年05期

3 付薇;易春華;徐賢坤;孫翔翔;何奇松;蔣家霞;馬琳;黃勝斌;熊毅;;廣西1株H3N8型馬流感病毒的分離與鑒定[J];畜牧與獸醫(yī);2011年10期

4 王曉鈞,賈斌,楊建德,田國斌,薛飛,唐秀英,相文華,沈榮顯;馬流感病毒A/馬/青海1/94株亞型鑒定及其HA基因序列特征[J];中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報;2003年03期

5 杜金玲;劉明;劉春國;李洪濤;張新濤;石薇琳;;H3N8亞型馬流感病毒拯救體系的建立[J];中國獸醫(yī)科學(xué);2009年05期

6 田建國;葉叢華;張文東;宋建領(lǐng);呂粵;岳亮;邱薇;馮子良;張思東;范泉水;張應(yīng)國;張富強;;云南地區(qū)馬流感病毒檢測及其HA基因序列分析[J];畜牧與獸醫(yī);2009年06期

7 肖成蕊;宋戰(zhàn)昀;楊立英;王偉利;孟慶峰;孟日增;;H3N8亞型馬流感病毒單克隆抗體的制備及鑒定[J];動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2011年06期

8 姬媛媛;郭巍;相文華;;馬流感病毒NP基因的原核表達(dá)及其抗原性分析[J];中國獸醫(yī)科學(xué);2010年11期

9 賈斌,王曉鈞,相文華,薛飛,趙立平,呂曉玲,沈榮顯;我國馬流感病毒不同分離株實驗感染SPF雞的研究[J];中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報;1999年01期

10 吳濤;林健;毛婭卿;韓春華;王嘉;潘潔;王哲;孔冬妮;蔣桃珍;劉月煥;;馬流感病毒H3亞型血凝抑制試驗抗原的研究[J];中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報;2013年12期

相關(guān)會議論文 前8條

1 相文華;;中國馬流感研究現(xiàn)狀[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜傳染病學(xué)分會第七屆全國會員代表大會暨第十三次學(xué)術(shù)研討會論文集（上冊）[C];2009年

2 楊建德;相文華;薛飛;王曉均;朱遠(yuǎn)茂;趙立平;呂曉玲;沈榮顯;李景鵬;;馬流感病毒青海株(A/Equine/Qinghai/1/94)相關(guān)特性的研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜傳染病學(xué)分會成立20周年慶典暨第十次學(xué)術(shù)研討會論文集（下）[C];2003年

3 郭巍;盧剛;戚亭;王曉鈞;相文華;;黑龍江地區(qū)一株馬流感病毒的分離與鑒定[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會——第三屆中國獸醫(yī)臨床大會論文集[C];2012年

4 郭巍;閆妍;王英原;劉霓虹;戴伶俐;李雪峰;趙立平;張春生;賀磊;周建華;相文華;;新疆地區(qū)一株馬流感病毒的分離及鑒定[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會畜牧獸醫(yī)生物技術(shù)學(xué)分會暨中國免疫學(xué)會獸醫(yī)免疫分會第七次研討會論文集[C];2008年

5 高志強;賴平安;劉月煥;柏亞鐸;喬彩霞;谷強;林健;韓春華;;H3N8馬流感病毒單重與雙重?zé)晒釸T-PCR檢測技術(shù)研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會2008年學(xué)術(shù)年會暨第六屆全國畜牧獸醫(yī)青年科技工作者學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2008年

6 戚亭;郭巍;戴伶俐;李雪峰;何娜;盛明巍;趙立平;李紅梅;相文華;;從驢體內(nèi)分離一株馬流感病毒及其HA基因的遺傳特征分析[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會畜牧獸醫(yī)生物技術(shù)學(xué)分會暨中國免疫學(xué)會獸醫(yī)免疫分會第八次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2010年

7 郭巍;戴伶俐;李雪峰;閆妍;王英原;周建華;相文華;;馬流感病毒多重RT-PCR檢測方法的建立[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會畜牧獸醫(yī)生物技術(shù)學(xué)分會暨中國免疫學(xué)會獸醫(yī)免疫分會第七次研討會論文集[C];2008年

8 田建國;葉叢華;宋建領(lǐng);張文東;張富強;李靜;呂粵;岳亮;張應(yīng)國;范泉水;;云南馬流感診斷及病毒HA基因序列分析[A];2008年中國微生物學(xué)會學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2008年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前3條

1 戚亭;中國部分地區(qū)馬流感病毒的分子流行病學(xué)調(diào)查和重組禽痘病毒載體疫苗的初步研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2011年

2 楊建德;馬流感病毒青海株相關(guān)特性研究及其基因組分析[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2003年

3 蔣桃珍;H3N8亞型馬流感病毒的致病性研究及滅活疫苗的研制[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 趙釗;一株馬流感病毒的基因序列測定分析及Donegal毒株的生物學(xué)特性研究[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

2 張翔;馬流感病毒反向遺傳系統(tǒng)的建立[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2016年

3 王贈超;馬流感病毒反向遺傳系統(tǒng)的構(gòu)建[D];華南農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

4 賈曉慶;馬流感病毒檢測方法的建立[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

5 姬媛媛;馬流感病毒抗原捕捉ELISA檢測方法的建立及其初步應(yīng)用[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2011年

6 閆妍;馬流感病毒H7N7亞型單抗制備及新疆毒株的分離鑒定[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

7 王英原;馬流感H3N8亞型血清學(xué)診斷方法的建立及滅活疫苗的初步研制[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

8 張延光;某馬場H3N8亞型馬流感病毒的分離鑒定及對犬易感性的實驗[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2009年

9 何晶;H3N8亞型馬流感病毒HA1基因原核表達(dá)及新疆部分地區(qū)馬流感血清學(xué)調(diào)查[D];新疆農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

10 李雪峰;H3N8亞型馬流感病毒內(nèi)蒙古株全基因序列分析及NS1基因的原核表達(dá)[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

，

本文編號：1431269