本文關(guān)鍵詞：禽坦布蘇病毒截短E蛋白單克隆抗體的制備及其抗原性分析　出處：《中國(guó)獸醫(yī)科學(xué)》2016年07期 　論文類(lèi)型：期刊論文

  更多相關(guān)文章： 坦布蘇病毒 截短囊膜E蛋白 單克隆抗體 抗原性

【摘要】：為制備禽坦布蘇病毒囊膜E蛋白截短蛋白的單克隆抗體并分析其抗原性,以坦布蘇病毒YY1分離株的cDNA為模板,通過(guò)RT-PCR擴(kuò)增編碼截短E蛋白的基因,并將其成功克隆到原核表達(dá)載體pET-28a(+)中。重組載體pET-28a(+)-YY1E轉(zhuǎn)化的大腸桿菌BL21(pLysS)在IPTG誘導(dǎo)下高效表達(dá)重組蛋白His-YY1E,該蛋白可與坦布蘇病毒感染鴨的血清反應(yīng)。用純化的His-YY1E免疫小鼠制備單克隆抗體,采用有限稀釋法經(jīng)過(guò)3輪篩選和鑒定最終獲得了2株分泌抗E蛋白的單克隆抗體細(xì)胞株1C5和3B11。制備的單克隆抗體與原核表達(dá)和病毒感染細(xì)胞中的E蛋白均能反應(yīng)。進(jìn)一步通過(guò)轉(zhuǎn)染截短蛋白E不同區(qū)域截短體與pEGFP-C3構(gòu)建的重組載體,并經(jīng)IFA檢測(cè),發(fā)現(xiàn)單克隆抗體1C5和3B11識(shí)別的截短E抗原區(qū)域位于C端35個(gè)氨基酸(105個(gè)堿基)之間。本研究為進(jìn)一步研究坦布蘇病毒E蛋白的功能,研制坦布蘇病毒病亞單位疫苗以及建立快速特異的坦布蘇病毒檢測(cè)方法奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:In order to prepare monoclonal antibody against E protein truncated protein and analyze its antigenicity, the cDNA of Tambusuvirus YY1 isolate was used as template. The gene encoding truncated E protein was amplified by RT-PCR. It was successfully cloned into prokaryotic expression vector pET-28a (). The recombinant vector pET-28a (pET-28a) was transformed into E. coli BL21pLysS. The recombinant protein His-YY1E was highly expressed under the induction of IPTG. The protein can react with the serum of tambusuvirus infected duck and immunize mice with purified His-YY1E to prepare monoclonal antibody. After three rounds of screening and identification by limited dilution method, two monoclonal antibody cell lines 1C5 and 3B1111 secreting anti-E protein were obtained. The prepared monoclonal antibodies were associated with prokaryotic expression and E. The recombinant vector was constructed by transfection of truncated bodies in different regions of truncated protein E and pEGFP-C3. And detected by IFA. The truncated E antigen region recognized by monoclonal antibodies 1C5 and 3B11 was found to be between 35 amino acids (105 bases) at the C-terminal. The preparation of TBV subunit vaccine and the establishment of a rapid and specific detection method for TBV have laid a foundation.
【作者單位】： 浙江大學(xué)農(nóng)業(yè)部動(dòng)物病毒學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國(guó)家科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(2015BAD12B01)
【分類(lèi)號(hào)】：S852.65
【正文快照】： 坦布蘇病毒(Tem busu virus,TM U V)是禽坦布蘇病毒病的病原。2010年4月,在我國(guó)南方養(yǎng)鴨業(yè)比較密集的福建、江浙一帶首先暴發(fā)了一種以蛋鴨產(chǎn)蛋急劇下降為主要臨床特征、出血性卵巢炎為主要病理變化特征的傳染病[1]。該病傳播快、發(fā)病率高,給我國(guó)沿海地區(qū)養(yǎng)鴨業(yè)帶來(lái)了嚴(yán)重的經(jīng)

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 段薇,張健,鄭劍玲,蘇丹,王美慧;抗呼吸道合胞病毒單克隆抗體的研制[J];微生物學(xué)雜志;2004年05期

2 遲素敏;;單克隆抗體的制備和鑒定[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;1986年Z1期

3 ;世界上最大的單克隆抗體生產(chǎn)廠[J];生物工程學(xué)報(bào);1987年02期

4 邱沙洛,趙宇,劉功云,陸全;單克隆抗體的純化[J];自然雜志;1990年12期

5 鄧永鴻;;用小鼠生產(chǎn)人的單克隆抗體嗎?[J];生物技術(shù)通報(bào);1990年03期

6 周寶宏;馬大龍;;在植物中產(chǎn)生單克隆抗體[J];生命的化學(xué)(中國(guó)生物化學(xué)會(huì)通訊);1990年03期

7 張明杰;單克隆抗體在農(nóng)業(yè)中有何用途?[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;1991年02期

8 葉群瑞,陳伯權(quán),吳美英;一種簡(jiǎn)單、快速、量大的辛酸純化單克隆抗體法[J];生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展;1991年01期

9 葛錫銳;單克隆抗體研制及應(yīng)用進(jìn)展[J];生物工程進(jìn)展;1993年06期

10 ;一種制備單克隆抗體的更有效而經(jīng)濟(jì)的方法[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(臨床生物化學(xué)與檢驗(yàn)學(xué)分冊(cè));1998年05期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 彭虹;舒翠麗;劉永全;王華;高杰英;;抗人α4單克隆抗體的制備和鑒定[A];中國(guó)免疫學(xué)會(huì)第四屆學(xué)術(shù)大會(huì)會(huì)議議程及論文摘要集[C];2002年

2 張錦超;楊金菊;吳瓊;李戩;陳勇;李輝;宋穎博;羅曉彤;任飛;高媛;杜雪梅;鞠艷芳;王兆卿;王京蘭;徐菡;柳曉蘭;崔玉芳;錢(qián)小紅;賀福初;高建恩;孫啟鴻;;高效鑒定單克隆抗體所識(shí)別未知抗原技術(shù)平臺(tái)的建立及應(yīng)用[A];中國(guó)蛋白質(zhì)組學(xué)第二屆學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要論文集[C];2004年

3 沈泓;梅建鳳;朱克寅;李敏;應(yīng)國(guó)清;;人絨毛膜促性腺激素單克隆抗體的制備[A];華東六省一市生物化學(xué)與分子生物學(xué)會(huì)2009年學(xué)術(shù)交流會(huì)論文摘要匯編[C];2009年

4 寧云山;司徒維娜;李妍;彭丹丹;洪燕華;劉宜楚;賀福初;孫啟鴻;李明;;人類(lèi)血漿蛋白單克隆抗體庫(kù)的初步建立及應(yīng)用研究[A];中國(guó)蛋白質(zhì)組學(xué)第二屆學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要論文集[C];2004年

5 高士爭(zhēng);張玉靜;郝軍元;;抗豬脂肪細(xì)胞特異膜蛋白單克隆抗體的制備與鑒定[A];動(dòng)物生理生化學(xué)分會(huì)第八次學(xué)術(shù)會(huì)議暨全國(guó)反芻動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)生理生化第三次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要匯編[C];2004年

6 許樂(lè)仁;M M Carr;K R Parsons;A W Walls;G A Hall;;用小鼠抗人類(lèi)肥大細(xì)胞類(lèi)胰蛋白酶單克隆抗體通過(guò)免疫過(guò)氧化物酶技術(shù)鑒定豬和牛的肥大細(xì)胞[A];中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)第五次會(huì)議論文摘要匯編[C];1992年

7 廖志雄;沈建根;來(lái)曉瑜;黃河;;抗間充質(zhì)干細(xì)胞單克隆抗體的制備及其生物學(xué)特性研究[A];浙江省免疫學(xué)會(huì)第五次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2004年

8 余自強(qiáng);董寧征;沈飛;白霞;邵波靜;阮長(zhǎng)耿;;抗人血小板糖蛋白VI單克隆抗體SZ118抑制血小板與膠原相互作用[A];2005年華東六省一市血液病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨浙江省血液病學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2005年

9 鄭佳琳;江飆;張東霞;施赫赫;郭霄峰;;狂犬病病毒糖蛋白抗原表位富集區(qū)單克隆抗體的制備[A];2010全國(guó)狂犬病防控高層論壇論文集[C];2010年

10 楊柳;張培;任瑞文;朱明星;王吉江;王煥峰;劉建偉;;登革病毒單克隆抗體制備及其生物學(xué)性狀分析[A];新發(fā)傳染病研究熱點(diǎn)研討會(huì)論文集[C];2013年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前4條

1 尹暉;最大單克隆抗體研制項(xiàng)目在馬山奠基[N];無(wú)錫日?qǐng)?bào);2010年

2 ;在兔子身上找抗體[N];科技日?qǐng)?bào);2004年

3 記者 胡德榮;腸道病毒EV71單克隆抗體研究獲進(jìn)展[N];健康報(bào);2012年

4 記者 鄒崢 藺以光;小試紙可以診斷大毛病[N];新華每日電訊;2000年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前8條

1 魏德強(qiáng);以植物病毒為載體建立新型的載體—半抗原免疫體系[D];東北林業(yè)大學(xué);2014年

2 鄒年莉;雞傳染性支氣管炎病毒Sczy3 S1蛋白中和性單克隆抗體的制備及其抗原表位的鑒定[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

3 秦克鋒;單純皰疹病毒糖蛋白的特性研究及其單克隆抗體的臨床應(yīng)用[D];第四軍醫(yī)大學(xué);1989年

4 李海乾;抗血小板膜糖蛋白凝血酶受體單克隆抗體的制備、鑒定及功能研究[D];蘇州大學(xué);2001年

5 樊一筍;兩株功能阻斷型CD154單克隆抗體的生物學(xué)特性及其應(yīng)用研究[D];蘇州大學(xué);2004年

6 黃海燕;抗SCIRR69單克隆抗體的制備及SCIRR69與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激關(guān)系的初步研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2008年

7 張小萍;SARS病毒S蛋白特異性單克隆抗體制備和抗原識(shí)別位點(diǎn)鑒定[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2005年

8 穆楊;MATSA的分離純化及其單克隆抗體的研制[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2005年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 王曉磊;流行性乙型腦炎病毒單克隆抗體的制備與prM-E蛋白抗原捕獲ELISA檢測(cè)方法的建立[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

2 胡澤宇;苊單克隆抗體的制備及免疫磁珠-ELISA方法的建立[D];吉林大學(xué);2016年

3 郭妹;基于液相色譜分析的單克隆抗體理化表征方法研究[D];華東理工大學(xué);2015年

4 王政;抗GST標(biāo)簽蛋白單克隆抗體的制備及其活性鑒定[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

5 居頌光;三株抗人促紅細(xì)胞生成素單克隆抗體的獲得及其生物學(xué)特性的研究[D];蘇州大學(xué);2001年

6 朱愛(ài)萍;人神經(jīng)元特異性烯醇化酶的基因克隆及單克隆抗體的制備和鑒定[D];山西醫(yī)科大學(xué);2004年

7 馬燕玲;抗ω-芋螺毒素MⅦA單克隆抗體的制備與鑒定[D];福建農(nóng)林大學(xué);2013年

8 陳思宇;甲型H1N1流感病毒單克隆抗體的制備及功能探索[D];蘇州大學(xué);2011年

9 趙群莉;血清胸苷激酶單克隆抗體酶促化學(xué)發(fā)光試劑盒的研制[D];天津醫(yī)科大學(xué);2013年

10 李玉;抗鴨坦布蘇病毒單克隆抗體的研制及初步應(yīng)用[D];揚(yáng)州大學(xué);2014年

，

本文編號(hào)：1419113