本文關(guān)鍵詞：豬流行性腹瀉病毒實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測(cè)方法的建立　出處：《中國(guó)動(dòng)物檢疫》2016年01期 　論文類(lèi)型：期刊論文

  更多相關(guān)文章： 豬流行性腹瀉病毒 N基因 實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR 檢測(cè)

【摘要】：根據(jù)Gen Bank報(bào)道的N基因高度保守核苷酸序列,設(shè)計(jì)并合成一對(duì)引物。上下游引物與Gen Bank中登錄的153株豬流行性腹瀉病毒(PEDV)N基因全長(zhǎng)序列匹配度分別是100%和97%。以本實(shí)驗(yàn)室分離流行毒株為模板,利用SYBR Green I熒光染料法進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增,獲得擴(kuò)增產(chǎn)物構(gòu)建重組質(zhì)粒作為陽(yáng)性對(duì)照,建立檢測(cè)豬流行性腹瀉病毒核酸的方法。同一樣品進(jìn)行3次重復(fù)試驗(yàn),變異系數(shù)0.9%。通過(guò)對(duì)臨床樣品進(jìn)行檢測(cè)和測(cè)序驗(yàn)證,核酸檢測(cè)結(jié)果中的陽(yáng)性樣品準(zhǔn)確率為100%。本研究所建立的熒光定量PCR檢測(cè)方法具有快速、靈敏、準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn),可用于臨床PEDV的檢測(cè)及分子流行病學(xué)調(diào)查。
[Abstract]:According to the highly conserved N gene nucleotide sequence of Gen reported by Bank, a pair of primers were designed and synthesized. The primers of Gen and Bank on the 153 strains of porcine epidemic diarrhea virus (PEDV) sequence of N gene, respectively is 100% and 97%. is separated by our laboratory strains as template, amplified by RT-PCR using SYBR Green I fluorescence dye method, obtained PCR products to construct recombinant plasmid as a positive control, set up a method for the detection of porcine epidemic diarrhea virus nucleic acid. The same samples were repeated 3 times, the coefficient of variation was detected by 0.9%. and sequencing of clinical samples, the positive samples of nucleic acid detection results in the accurate rate of fluorescence quantitative PCR detection the establishment of the Institute of 100%. method is fast, sensitive, accurate and can be used for detection and molecular epidemiology of clinical PEDV.

【作者單位】： 浙江農(nóng)林大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院;中國(guó)動(dòng)物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心;金華職業(yè)技術(shù)學(xué)院農(nóng)業(yè)與生物工程學(xué)院;
【基金】：浙江省科技廳項(xiàng)目(2014C32061,2014C02003) 金華市農(nóng)業(yè)類(lèi)重點(diǎn)研究項(xiàng)目(2014-2-003)
【分類(lèi)號(hào)】：S852.65
【正文快照】： 豬流行性腹瀉(Porcine epidemic diarrhea,PED)是由豬流行性腹瀉病毒(PEDV)引起豬的一種高度接觸性腸道傳染病,其特征為嘔吐、腹瀉、脫水[1]。本病主要發(fā)生在當(dāng)年12月至P次年2月,夏季也可發(fā)生,可以感染各年齡P階段的豬,其中哺乳仔豬最易感,發(fā)病率可達(dá)100%,平均死亡率可達(dá)50%。

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 廉紅霞;高騰云;傅彤;孫宇;李改英;;實(shí)時(shí)熒光定量PCR定量方法研究進(jìn)展[J];江西農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào);2010年10期

2 李文濤;王俊東;楊利峰;王宏偉;韓少杰;;實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)及其應(yīng)用[J];生物技術(shù)通訊;2006年01期

3 鄧文星;張映;;實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)綜述[J];生物技術(shù)通報(bào);2007年05期

4 陳學(xué)森;王金玉;張跟喜;張濤;唐瑩;施會(huì)強(qiáng);;京海黃雞鈉氫離子交換泵1基因?qū)崟r(shí)熒光定量PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立[J];中國(guó)畜牧獸醫(yī);2014年02期

5 靳溪;薛秀花;李潔;向本瓊;;實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)在發(fā)育生物學(xué)實(shí)驗(yàn)[J];實(shí)驗(yàn)室研究與探索;2014年07期

6 歐陽(yáng)松應(yīng),楊冬,歐陽(yáng)紅生,馬鶴雯;實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)及其應(yīng)用[J];生命的化學(xué);2004年01期

7 付春華;陳孝平;余龍江;;實(shí)時(shí)熒光定量PCR的應(yīng)用和進(jìn)展[J];激光生物學(xué)報(bào);2005年06期

8 王光華;趙偉春;程家安;;實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)及其在昆蟲(chóng)學(xué)研究中的應(yīng)用[J];昆蟲(chóng)學(xué)報(bào);2008年12期

9 孔繁德;彭海濱;徐淑菲;陳瓊;陸承平;;沙門(mén)菌實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒的研制與應(yīng)用[J];中國(guó)獸醫(yī)科學(xué);2006年08期

10 袁亞男;劉文忠;;實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)的類(lèi)型、特點(diǎn)與應(yīng)用[J];中國(guó)畜牧獸醫(yī);2008年03期

相關(guān)會(huì)議論文 前4條

1 許小紅;劉在新;包慧芳;王雯慧;牛繼偉;;實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR技術(shù)及其存在的問(wèn)題和優(yōu)化方案[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)2006學(xué)術(shù)年會(huì)論文集（上冊(cè)）[C];2006年

2 李平;劉蘋(píng);熊仁平;趙艷;朱敏;周元國(guó);;Wistar大鼠c-Ski基因部分序列的克隆、測(cè)序及實(shí)時(shí)熒光定量PCR的建立[A];第九屆西南三省一市生物化學(xué)與分子生物學(xué)學(xué)術(shù)交流會(huì)論文集[C];2008年

3 張宜瑾;王萍;叢敏;王宇;尤紅;賈繼東;王寶恩;;實(shí)時(shí)熒光定量PCR測(cè)定大鼠肝臟細(xì)胞外基質(zhì)mRNA水平[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十二次全國(guó)病毒性肝炎及肝病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2005年

4 張賀楠;賴漢漳;齊巖;孔留五;張小桃;曹偉勝;廖明;;雞IFN-α，-β，，-γ實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測(cè)方法的建立[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)2008年學(xué)術(shù)年會(huì)暨第六屆全國(guó)畜牧獸醫(yī)青年科技工作者學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2008年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前2條

1 龐方圓;羊痘病毒實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法的建立[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

2 馬飛;極大節(jié)旋藻實(shí)時(shí)熒光定量PCR內(nèi)參基因的選擇[D];中國(guó)海洋大學(xué);2012年

本文編號(hào)：1388556