本文關鍵詞：豬偽狂犬病毒引起的細胞自噬和凋亡的初步研究　出處：《東北農業(yè)大學》2016年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：豬偽狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)屬于皰疹病毒科、皰疹病毒屬,又被稱為豬皰疹病毒1型,可以引起多種家畜和野生動物感染發(fā)生偽狂犬病,給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大經濟損失。細胞自噬能夠通過自我消化細胞成分的方法調節(jié)蛋白質合成和蛋白質降解之間的平衡。細胞凋亡在生物體進化、維持內環(huán)境穩(wěn)定以及在多個系統(tǒng)的發(fā)育中起著重要的作用。細胞自噬與凋亡是引起細胞程序性死亡的主要途徑,二者共同決定了細胞在受到病原入侵時的命運,因此自噬和凋亡之間的平衡對病毒的復制周期的實現和致病性有著至關重要的影響。自噬和凋亡具有部分通用的上游信號途徑,有時可能會導致自噬和凋亡的共同發(fā)生;同時,細胞可以在自噬和凋亡之間互相轉化。本實驗結果表明PRV感染對細胞自噬反應有雙重影響,在感染早期階段,PRV能夠誘導細胞自噬;隨著病毒蛋白的表達,細胞自噬反應被抑制。通過流式細胞檢測技術和Western blot分析發(fā)現PRV能夠誘導Vero細胞發(fā)生caspase依賴性細胞凋亡。本實驗通過化學抑制劑和誘導劑調節(jié)PRV引起的細胞自噬或凋亡,研究表明,在自噬體形成階段誘導細胞自噬能夠抑制細胞凋亡;在自噬體形成階段抑制細胞自噬能夠誘導細胞凋亡;抑制自噬體與溶酶體融合后的降解能夠促進細胞凋亡;用Caspase-3抑制劑抑制細胞凋亡后,自噬相關蛋白LC3-I至LC3-II的轉化和SQSTM1/P62的降解增多。以上結果表明PRV引起的細胞自噬和凋亡作用拮抗。自噬與凋亡的相互關系能夠影響PRV的復制,自噬增多或者自噬體與溶酶體融合后的降解被抑制均能抑制病毒的復制。已有研究表明PRV早期蛋白US3能夠通過活化PI3K/AKT途徑抑制細胞凋亡,為了確定US3能否通過該途徑對細胞自噬產生影響,本實驗通過PI3K、AKT抑制劑處理感染PRV的細胞后,發(fā)現細胞自噬增多。在感染He N1病毒株的細胞中轉染US3質粒,與對照細胞相比,轉染US3質粒后AKT的磷酸化增多,細胞自噬被抑制;分別用△US3 He N1病毒株和HeN1病毒株感染Vero細胞,研究表明感染△US3 He N1病毒株的細胞與感染HeN1病毒株的細胞相比,AKT的磷酸化減少,細胞自噬增多。以上實驗結果表明病毒早期蛋白US3可能通過活化PI3K/AKT途徑抑制細胞自噬。
【學位授予單位】：東北農業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S852.65
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本文編號：1320298