本文關鍵詞：雞快慢羽候選基因的篩選　出處：《揚州大學》2016年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：雞的快慢羽可用于雌雄鑒別,且與生產(chǎn)性狀有一定關聯(lián)。已知雞的快慢羽基因與性染色體Z上的內源性反轉錄病毒ev21連鎖。在快羽雞中,唯一的ev21插入位點位于催乳素受體基因(PRLR)和精子鞭毛編碼蛋白2(SPEF2)基因序列之間。而在慢羽雞中,兩個ev21插入位點中的一個被ev21占據(jù)。在這兩個插入位點之間為部分重復的PRLR (duplicated PRLR, dPRLR) 和 SPEF2 (duplicated SPEF2, dSPEF2)所形成的融合基因(dPRLR/dSPEF2),而在位點的兩側仍為PRLR 和 SPEF2基因序列。由于目前缺乏強有力的證據(jù),這三個基因(即PRLR, SPEF2和 dPRLR/dSPEF2)均是雞快慢羽性狀控制基因的候選者。為了進一步對這三個候選基因進行甄別。本研究首先對實驗用慢羽雛雞中融合基因拼接處的核酸序列進行了PCR擴增及測序,確定融合基因序列的拼接方式與已報道的拼接方式是否相同；其次,利用鏈特異性RT-PCR確定慢羽雞融合基因是否轉錄,且是否存在雙向轉錄而形成具有表達調控作用的雙鏈RNA分子：最后,利用實時熒光定量技術,測定三個候選基因在快慢羽雛雞皮膚中的表達水平,為進一步甄別快慢羽性狀控制基因提供科學依據(jù)。數(shù)據(jù)顯示：1.利用融合基因特異性引物,以蘇禽綠殼蛋雞和海塞克斯慢羽雞的基因組DNA為模板,本研究獲得了一個1,429 bp大小的PCR擴增片段。測序分析表明,融合基因由PRLR外顯子12下游578 bp處和SPEF2內含子4下游1,543 bp處反向拼接而成,與已報道的拼接序列不同,提示拼接序列可能存在品種特異性。2.經(jīng)反轉錄定量PCR(RT-qPCR)測定,dPRLR/dSPEF2融合基因可在且僅在慢羽雞皮膚中轉錄。通過鏈特異性RT-qPCR,本研究進一步確定該融合基因是雙向轉錄的,可形成一個雙鏈RNA分子。因此,該融合基因可能通過形成的雙鏈RNA分子來調控鄰近基因的表達,從而影響雞羽毛生長的速度。不過,此推測還有待深入研究加以驗證。3.利用實時熒光定量PCR技術對1日齡快慢羽公／母雞中PRLR、SPEF2和 dPRLR/dSPEF2基因在皮膚中的表達水平進行測定,數(shù)據(jù)表明公母綠殼蛋雞和公海塞克斯雞皮膚中的PRLR轉錄本豐富度在快慢羽之間沒有顯著差異,在同一羽型的個體間差異較大。因此,PRLR的表達與快慢羽表型形成沒有直接關系,提示該基因不是雞快慢羽候選基因的有力競爭者。與此相反,數(shù)據(jù)表明母綠殼蛋雞皮膚中SPEF2的轉錄本豐富度在快慢羽之間存在極顯著差異(P0.0J),且慢羽是快羽的16倍,提示SPEF2是快慢羽候選基因的有力競爭者。此外,融合基因(dPRLR/dSPEF2)在皮膚中的表達水平僅為PRLR的2.9%左右,提示融合基因不可能以PRLR或SPEF2相同的基因功能來影響羽毛的生長速度。綜上所述,PRLR基因不是理想的雞快慢羽候選基因,而融合基因dPRLR/dSPEF2和SPEF2基因是候選基因的有力競爭者。對它們的功能、作用機制以及表達調控進行研究將有助于闡明雞快慢羽形成的分子基礎。
【學位授予單位】：揚州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S831

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1 羅晶,張宏,楊潤清;動態(tài)性狀候選基因檢測效率分析[J];上海交通大學學報(農(nóng)業(yè)科學版);2004年04期

2 楊志剛,王寶維,王雷;影響豬肉脂肪性狀主要候選基因的研究進展[J];動物科學與動物醫(yī)學;2005年05期

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本文編號：1308491