本文關(guān)鍵詞：雞快慢羽候選基因的篩選　出處：《揚(yáng)州大學(xué)》2016年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

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【摘要】：雞的快慢羽可用于雌雄鑒別,且與生產(chǎn)性狀有一定關(guān)聯(lián)。已知雞的快慢羽基因與性染色體Z上的內(nèi)源性反轉(zhuǎn)錄病毒ev21連鎖。在快羽雞中,唯一的ev21插入位點(diǎn)位于催乳素受體基因(PRLR)和精子鞭毛編碼蛋白2(SPEF2)基因序列之間。而在慢羽雞中,兩個(gè)ev21插入位點(diǎn)中的一個(gè)被ev21占據(jù)。在這兩個(gè)插入位點(diǎn)之間為部分重復(fù)的PRLR (duplicated PRLR, dPRLR) 和 SPEF2 (duplicated SPEF2, dSPEF2)所形成的融合基因(dPRLR/dSPEF2),而在位點(diǎn)的兩側(cè)仍為PRLR 和 SPEF2基因序列。由于目前缺乏強(qiáng)有力的證據(jù),這三個(gè)基因(即PRLR, SPEF2和 dPRLR/dSPEF2)均是雞快慢羽性狀控制基因的候選者。為了進(jìn)一步對(duì)這三個(gè)候選基因進(jìn)行甄別。本研究首先對(duì)實(shí)驗(yàn)用慢羽雛雞中融合基因拼接處的核酸序列進(jìn)行了PCR擴(kuò)增及測(cè)序,確定融合基因序列的拼接方式與已報(bào)道的拼接方式是否相同；其次,利用鏈特異性RT-PCR確定慢羽雞融合基因是否轉(zhuǎn)錄,且是否存在雙向轉(zhuǎn)錄而形成具有表達(dá)調(diào)控作用的雙鏈RNA分子：最后,利用實(shí)時(shí)熒光定量技術(shù),測(cè)定三個(gè)候選基因在快慢羽雛雞皮膚中的表達(dá)水平,為進(jìn)一步甄別快慢羽性狀控制基因提供科學(xué)依據(jù)。數(shù)據(jù)顯示：1.利用融合基因特異性引物,以蘇禽綠殼蛋雞和海塞克斯慢羽雞的基因組DNA為模板,本研究獲得了一個(gè)1,429 bp大小的PCR擴(kuò)增片段。測(cè)序分析表明,融合基因由PRLR外顯子12下游578 bp處和SPEF2內(nèi)含子4下游1,543 bp處反向拼接而成,與已報(bào)道的拼接序列不同,提示拼接序列可能存在品種特異性。2.經(jīng)反轉(zhuǎn)錄定量PCR(RT-qPCR)測(cè)定,dPRLR/dSPEF2融合基因可在且僅在慢羽雞皮膚中轉(zhuǎn)錄。通過(guò)鏈特異性RT-qPCR,本研究進(jìn)一步確定該融合基因是雙向轉(zhuǎn)錄的,可形成一個(gè)雙鏈RNA分子。因此,該融合基因可能通過(guò)形成的雙鏈RNA分子來(lái)調(diào)控鄰近基因的表達(dá),從而影響雞羽毛生長(zhǎng)的速度。不過(guò),此推測(cè)還有待深入研究加以驗(yàn)證。3.利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)對(duì)1日齡快慢羽公／母雞中PRLR、SPEF2和 dPRLR/dSPEF2基因在皮膚中的表達(dá)水平進(jìn)行測(cè)定,數(shù)據(jù)表明公母綠殼蛋雞和公海塞克斯雞皮膚中的PRLR轉(zhuǎn)錄本豐富度在快慢羽之間沒(méi)有顯著差異,在同一羽型的個(gè)體間差異較大。因此,PRLR的表達(dá)與快慢羽表型形成沒(méi)有直接關(guān)系,提示該基因不是雞快慢羽候選基因的有力競(jìng)爭(zhēng)者。與此相反,數(shù)據(jù)表明母綠殼蛋雞皮膚中SPEF2的轉(zhuǎn)錄本豐富度在快慢羽之間存在極顯著差異(P0.0J),且慢羽是快羽的16倍,提示SPEF2是快慢羽候選基因的有力競(jìng)爭(zhēng)者。此外,融合基因(dPRLR/dSPEF2)在皮膚中的表達(dá)水平僅為PRLR的2.9%左右,提示融合基因不可能以PRLR或SPEF2相同的基因功能來(lái)影響羽毛的生長(zhǎng)速度。綜上所述,PRLR基因不是理想的雞快慢羽候選基因,而融合基因dPRLR/dSPEF2和SPEF2基因是候選基因的有力競(jìng)爭(zhēng)者。對(duì)它們的功能、作用機(jī)制以及表達(dá)調(diào)控進(jìn)行研究將有助于闡明雞快慢羽形成的分子基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：S831

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中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 羅晶,張宏,楊潤(rùn)清;動(dòng)態(tài)性狀候選基因檢測(cè)效率分析[J];上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)(農(nóng)業(yè)科學(xué)版);2004年04期

2 楊志剛,王寶維,王雷;影響豬肉脂肪性狀主要候選基因的研究進(jìn)展[J];動(dòng)物科學(xué)與動(dòng)物醫(yī)學(xué);2005年05期

3 王莉興;魯紹雄;;豬產(chǎn)仔數(shù)相關(guān)候選基因的研究進(jìn)展[J];上海畜牧獸醫(yī)通訊;2008年04期

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5 吳語(yǔ)寧;叢凡m，

本文編號(hào)：1308491