本文關(guān)鍵詞：siRNA干擾AR基因?qū)γ坊孤谷总浌羌?xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育的研究

  更多相關(guān)文章： 梅花鹿鹿茸 軟骨細(xì)胞 AR siRNA 細(xì)胞增殖 細(xì)胞周期

【摘要】：在雄性梅花鹿的生茸期內(nèi),血漿中雌二醇和睪酮的含量會(huì)從高峰值同時(shí)下降,并在整個(gè)生茸期維持較低的水平。說(shuō)明一定范圍內(nèi)的低水平的雄激素有利于雄鹿的生茸。在赤鹿的鹿茸組織中測(cè)定出了AR的轉(zhuǎn)錄物。而雄激素對(duì)鹿茸的生長(zhǎng)發(fā)育的調(diào)控作用需要通過(guò)與AR特異性結(jié)合形成復(fù)合物后起作用,AR是由受體基因編碼控制的,如果AR基因發(fā)生變異,一定會(huì)影響AR及其復(fù)合物的結(jié)構(gòu)和功能,并最終導(dǎo)致其生物學(xué)效應(yīng)的改變,就可能會(huì)對(duì)鹿茸的生長(zhǎng)和發(fā)育產(chǎn)生相應(yīng)的影響。本研究先通過(guò)克隆出梅花鹿鹿茸軟骨細(xì)胞AR基因的序列,再以AR為靶基因設(shè)計(jì)相應(yīng)的siRNA,應(yīng)用siRNA干擾技術(shù),并將篩選出的高效的siRNA導(dǎo)入梅花鹿鹿茸軟骨細(xì)胞,研究siRNA對(duì)軟骨細(xì)胞AR蛋白和mRNA的表達(dá),以及對(duì)軟骨細(xì)胞的增殖、周期和凋亡的影響,探討雄激素及其受體對(duì)鹿茸生長(zhǎng)的調(diào)控機(jī)制。研究的內(nèi)容和結(jié)果如下:(1)獲得的梅花鹿AR部分序列長(zhǎng)為2346 bp,序列比對(duì)分析表明,該序列為梅花鹿AR基因cDNA序列,開(kāi)放閱讀框部分共編碼781個(gè)氨基酸。序列已經(jīng)向Genbank提交,登錄號(hào)為KT599413.1.(2)序列比對(duì)結(jié)果表明AR基因和AR蛋白在梅花鹿與狍子、牛、綿羊間的同源性均較高。與牛(Bos taurus)、綿羊(Ovis aries)、狍子(Capreolus)的核苷酸同源性均為98%;與人(Human)的核苷酸同源性為89%。與牛(Bos taurus)、綿羊(Ovis aries)、狍子(Capreolus)氨基酸序列進(jìn)行比對(duì)同源性均為98%;與人(Homo sapiens)的氨基酸序列同源性為87%.(3)通過(guò)RNAiMax轉(zhuǎn)染軟骨細(xì)胞48 h后,RT-PCR方法對(duì)比分析siRNA處理組與對(duì)照組,mRNA的相對(duì)表達(dá)量極顯著降低(P0.01),抑制率在70%左右;Western Blot法檢測(cè)結(jié)果表明處理組的AR蛋白的表達(dá)情況顯著降低(P0.05),說(shuō)明siRNA的干擾效果明顯。(4)AR siRNA對(duì)鹿茸軟骨細(xì)胞的凋亡影響不顯著。收集的上清檢測(cè)結(jié)果表明睪酮和雌二醇的激素水平變化不明顯(P0.05);而細(xì)胞周期結(jié)果顯示試驗(yàn)組細(xì)胞周期阻滯在S期(P0.01),說(shuō)明siRNA處理細(xì)胞能夠顯著的抑制細(xì)胞增殖。結(jié)果表明,AR在鹿茸的生長(zhǎng)過(guò)程中有重要的作用。AR siRNA能夠降低AR mRNA和AR蛋白的表達(dá),通過(guò)調(diào)控細(xì)胞周期S期的比例抑制細(xì)胞的增殖,也間接說(shuō)明雄激素對(duì)梅花鹿鹿茸軟骨細(xì)胞的生長(zhǎng)發(fā)育有促進(jìn)作用。
【學(xué)位授予單位】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S825

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 俞立強(qiáng);沈嵐;熊佩華;;鹿茸丸對(duì)糖尿病腎病大鼠血糖、血脂及腎功能的影響[J];中國(guó)中醫(yī)急癥;2011年12期

2 于偉;王振宇;劉瑜;周麗萍;;鹿茸提取物與黑木耳多糖協(xié)同作用對(duì)糖尿病小鼠血糖血脂的影響[J];東北林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);2010年06期

3 劉瑜;王振宇;周麗萍;;鹿茸提取物對(duì)糖尿病小鼠血糖血脂的影響[J];食品科技;2010年04期

4 王好杰;葉偉成;倪培華;王春霞;;鹿茸方對(duì)糖尿病腎病大鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β_1基因表達(dá)的影響[J];中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志;2008年09期

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 熊家軍;梅花鹿激素及其受體基因變異對(duì)產(chǎn)茸量的調(diào)控效應(yīng)研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

，

本文編號(hào)：1285700