本文關(guān)鍵詞：表達(dá)堆型艾美耳球蟲3-1E蛋白的三種重組乳酸乳球菌構(gòu)建與鑒定

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【摘要】：為探索堆型艾美耳球蟲(Eimeria acervulina)表面抗原3-1E基因在乳酸乳球菌L.lactis NZ9000中的不同表達(dá)形式,首先通過PCR擴(kuò)增3-1E目的基因片段,克隆入pTX8048載體中,構(gòu)建胞內(nèi)表達(dá)質(zhì)粒p TX8048-3-1E;將乳球菌未知分泌蛋白(Usp45)信號(hào)肽(SP)與3-1E基因片段融合(SP-Δ3-1E),并克隆入pTX8048中,構(gòu)建分泌表達(dá)質(zhì)粒pTX8048-SP-Δ3-1E;將化膿性鏈球菌M6蛋白細(xì)胞壁錨定序列(Cell wall anchor,CWA)克隆入pTX8048-SP-Δ3-1E中的Δ3-1E下游(去除Δ3-1E終止密碼子,即NAΔ3-1E),構(gòu)建表面表達(dá)質(zhì)粒pTX8048-SP-NAΔ3-1E-CWA;將三種表達(dá)載體電轉(zhuǎn)化到乳酸乳球菌L.lactis NZ9000中,構(gòu)建三種乳酸乳球菌L.lactis NZ9000/pTX8048-3-1E(胞內(nèi)表達(dá)菌)、L.lactis NZ9000/pTX8048-SP-Δ3-1E(分泌表達(dá)菌)及L.lactis NZ9000/pTX8048-SP-NAΔ3-1E-CWA(表面表達(dá)),通過Western blot來檢測(cè)3-1E目的蛋白在三種陽性乳酸乳球菌中的表達(dá)。結(jié)果表明,構(gòu)建的三種重組乳酸乳球菌均可表達(dá)目的蛋白。研究結(jié)果為進(jìn)一步評(píng)估重組乳酸乳球菌的抗球蟲免疫保護(hù)作用及后續(xù)非抗性標(biāo)記乳酸菌體系建立奠定基礎(chǔ)。
【作者單位】： 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院;
【基金】：國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(30901061) 黑龍江省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(C201422) 黑龍江省博士后啟動(dòng)金項(xiàng)目(LBH-Q14019)
【分類號(hào)】：S852.723
【正文快照】： 頂復(fù)門艾美耳屬的艾美耳球蟲引起的雞球蟲病嚴(yán)重危害世界養(yǎng)禽業(yè)發(fā)展。目前該病的防控方法主要采用化學(xué)藥物和致弱蟲苗,但存在不足之處。近年來,基于雞球蟲無性生殖階段子孢子和裂殖子表面的保守抗原進(jìn)行的基因工程疫苗研制倍受關(guān)注。研究表明,3-1E基因編碼雞艾美耳球蟲子孢子

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本文編號(hào)：1254476