本文關(guān)鍵詞：基于上轉(zhuǎn)發(fā)光技術(shù)對(duì)鼠疫菌在感染鼠臟器中的分布及致病關(guān)聯(lián)的研究

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【摘要】：鼠疫耶爾森氏菌(Yersinia pestis,以下簡(jiǎn)稱鼠疫菌)主要可以引起腺鼠疫、肺鼠疫以及敗血癥型鼠疫。主要表現(xiàn)為發(fā)熱、寒戰(zhàn)、頭痛乏力,并伴有嚴(yán)重毒血癥癥狀、全身酸痛且煩躁不安淋巴結(jié)腫大、肺炎、出血傾向等。而在自然界中,鼠疫主要是在嚙齒類動(dòng)物與跳蚤之間相互傳播并繁殖�？v觀歷史上共有三次鼠疫的大規(guī)模爆發(fā),而其中的第二次鼠疫更是綿延了數(shù)百年,造成了數(shù)以千萬計(jì)的死亡,由于鼠疫菌有著傳播快、感染性強(qiáng)、致死率高等特點(diǎn),因此對(duì)它的的檢測(cè)以及其在感染鼠體內(nèi)臟器中的分布及致病關(guān)聯(lián)研究十分必要。本研究主要實(shí)驗(yàn)內(nèi)容如下:選取30只8周齡的雌性BALB/c小鼠對(duì)其進(jìn)行分組并通過腹腔、滴鼻、靜脈注射等方式進(jìn)行鼠疫菌攻毒后,10只一組分離飼養(yǎng)并每隔8小時(shí)觀察小鼠的情況(精神狀態(tài)、食欲、背毛等),并每組隨機(jī)小鼠進(jìn)行脫頸處死取材(心、肝、脾、肺)研磨制備為待測(cè)液后與標(biāo)記了鼠疫抗體的上轉(zhuǎn)發(fā)光顆粒進(jìn)行混勻結(jié)合,最后通過流式細(xì)胞儀對(duì)制備好的樣品進(jìn)行檢測(cè),觀察患鼠疫小鼠不同臟器內(nèi)的鼠疫菌分布情況并對(duì)其致病關(guān)聯(lián)性進(jìn)行討論。目的:將上轉(zhuǎn)換發(fā)光顆粒(Up-converting Phosphor,UCPs)作為標(biāo)記物應(yīng)用于免疫檢測(cè),充分利用其獨(dú)特的上轉(zhuǎn)換發(fā)光性質(zhì),對(duì)鼠疫菌抗體進(jìn)行標(biāo)記,然后應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)對(duì)其在患病小鼠體內(nèi)各個(gè)臟器分布情況進(jìn)行檢測(cè),實(shí)現(xiàn)對(duì)不同臟器內(nèi)鼠疫菌分布的靈敏快速檢測(cè)。方法:對(duì)直徑大小約為50nm的UCP顆粒的表面進(jìn)行一系列的修飾活化包括氨基化(添加氨基基團(tuán))與醛基化(添加醛基基團(tuán))然后將其與鼠疫特異抗體相標(biāo)記,之后與制備好的感染鼠疫臟器單細(xì)胞懸液混合孵育后經(jīng)過流式細(xì)胞儀檢測(cè),評(píng)價(jià)分析不同臟器中鼠疫菌的分布情況以及與致病性的關(guān)聯(lián)并通過成熟的試紙條層析技術(shù)對(duì)檢測(cè)結(jié)果加以佐證;結(jié)果:(1)優(yōu)化了上轉(zhuǎn)發(fā)光顆粒的修飾過程,并通過透射電子顯微鏡對(duì)修飾后的顆粒進(jìn)行觀察發(fā)現(xiàn),經(jīng)過修飾后的顆粒可以粒徑大小均一,在溶液中有著良好的分散性,為其作為生物標(biāo)記奠定了基礎(chǔ);(2)建立了基于上轉(zhuǎn)發(fā)光技術(shù)的對(duì)鼠疫菌的試紙條免疫層析方法;(3)建立了基于上轉(zhuǎn)發(fā)光的流式檢測(cè)技術(shù),并可以對(duì)鼠疫耶爾森氏菌完成快速的分析檢測(cè);結(jié)論:結(jié)合了上轉(zhuǎn)發(fā)光技術(shù)的流式細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)可以對(duì)鼠疫菌完成快速、精準(zhǔn)的檢測(cè),并具有良好的靈敏性與特異性,為防范生物性恐怖襲擊、了解鼠疫菌致病關(guān)聯(lián)、以及應(yīng)對(duì)突發(fā)疫情提供了強(qiáng)有力的檢測(cè)手段。
【學(xué)位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S855

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本文編號(hào)：1250466