本文關鍵詞：基于上轉發(fā)光技術對鼠疫菌在感染鼠臟器中的分布及致病關聯(lián)的研究

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【摘要】：鼠疫耶爾森氏菌(Yersinia pestis,以下簡稱鼠疫菌)主要可以引起腺鼠疫、肺鼠疫以及敗血癥型鼠疫。主要表現(xiàn)為發(fā)熱、寒戰(zhàn)、頭痛乏力,并伴有嚴重毒血癥癥狀、全身酸痛且煩躁不安淋巴結腫大、肺炎、出血傾向等。而在自然界中,鼠疫主要是在嚙齒類動物與跳蚤之間相互傳播并繁殖�？v觀歷史上共有三次鼠疫的大規(guī)模爆發(fā),而其中的第二次鼠疫更是綿延了數(shù)百年,造成了數(shù)以千萬計的死亡,由于鼠疫菌有著傳播快、感染性強、致死率高等特點,因此對它的的檢測以及其在感染鼠體內臟器中的分布及致病關聯(lián)研究十分必要。本研究主要實驗內容如下:選取30只8周齡的雌性BALB/c小鼠對其進行分組并通過腹腔、滴鼻、靜脈注射等方式進行鼠疫菌攻毒后,10只一組分離飼養(yǎng)并每隔8小時觀察小鼠的情況(精神狀態(tài)、食欲、背毛等),并每組隨機小鼠進行脫頸處死取材(心、肝、脾、肺)研磨制備為待測液后與標記了鼠疫抗體的上轉發(fā)光顆粒進行混勻結合,最后通過流式細胞儀對制備好的樣品進行檢測,觀察患鼠疫小鼠不同臟器內的鼠疫菌分布情況并對其致病關聯(lián)性進行討論。目的:將上轉換發(fā)光顆粒(Up-converting Phosphor,UCPs)作為標記物應用于免疫檢測,充分利用其獨特的上轉換發(fā)光性質,對鼠疫菌抗體進行標記,然后應用流式細胞術對其在患病小鼠體內各個臟器分布情況進行檢測,實現(xiàn)對不同臟器內鼠疫菌分布的靈敏快速檢測。方法:對直徑大小約為50nm的UCP顆粒的表面進行一系列的修飾活化包括氨基化(添加氨基基團)與醛基化(添加醛基基團)然后將其與鼠疫特異抗體相標記,之后與制備好的感染鼠疫臟器單細胞懸液混合孵育后經(jīng)過流式細胞儀檢測,評價分析不同臟器中鼠疫菌的分布情況以及與致病性的關聯(lián)并通過成熟的試紙條層析技術對檢測結果加以佐證;結果:(1)優(yōu)化了上轉發(fā)光顆粒的修飾過程,并通過透射電子顯微鏡對修飾后的顆粒進行觀察發(fā)現(xiàn),經(jīng)過修飾后的顆粒可以粒徑大小均一,在溶液中有著良好的分散性,為其作為生物標記奠定了基礎;(2)建立了基于上轉發(fā)光技術的對鼠疫菌的試紙條免疫層析方法;(3)建立了基于上轉發(fā)光的流式檢測技術,并可以對鼠疫耶爾森氏菌完成快速的分析檢測;結論:結合了上轉發(fā)光技術的流式細胞檢測技術可以對鼠疫菌完成快速、精準的檢測,并具有良好的靈敏性與特異性,為防范生物性恐怖襲擊、了解鼠疫菌致病關聯(lián)、以及應對突發(fā)疫情提供了強有力的檢測手段。
【學位授予單位】：吉林農業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S855

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前9條

1 周冬生;楊瑞馥;;鼠疫研究進展與展望[J];解放軍醫(yī)學雜志;2010年10期

2 王輝;沈偉哉;黃榮春;伍澤庚;;匍扇藻多糖抗病毒活性的初步研究(英文)[J];營養(yǎng)學報;2007年03期

3 岳明祥;劉楠;寶建喜;張運剛;楊春華;高偉;高志賢;;斑點金-薄層色譜法檢測鼠疫耶爾森氏菌的實驗研究[J];中國地方病防治雜志;2005年06期

4 白東亭,祁自柏,王軍志;我國生物芯片產(chǎn)業(yè)化發(fā)展現(xiàn)狀及存在問題[J];中國生物制品學雜志;2004年05期

5 黃海,馬文麗,董興齊,張寶,吳清華,鄭文嶺;基因芯片用于鼠疫快速診斷的初步研究[J];第一軍醫(yī)大學學報;2004年01期

6 熱娜·吐爾地,徐秉臣,王信惠,阿扎提·熱合木,梅桂;異硫氫酸銨熒光素標記鼠疫F1 McAb染色法快速檢驗鼠疫菌[J];地方病通報;2003年02期

7 浦清江,張春華,叢顯斌,趙志海;鼠疫放射免疫沉淀試驗在鼠疫監(jiān)測中的應用及效果評價[J];中國地方病防治雜志;2002年05期

8 張貴,張貴軍,王身榮,孫啟廷,單國光;我國鼠疫自然疫源地及疫情概況[J];中國地方病防治雜志;2002年02期

9 高崇華,劉振才,張春華;關于我國鼠疫控制策略探討[J];中國地方病學雜志;2001年06期

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本文編號：1250466