發(fā)布時間：2017-12-03 07:31

  本文關(guān)鍵詞：Ⅰ類整合子介導(dǎo)糞腸球菌多重耐藥性的研究

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【摘要】：糞腸球菌是人和動物腸道內(nèi)的正常菌群之一,為一種重要的條件致病菌,常作為細(xì)菌耐藥性的“指示菌”。隨著抗菌藥物在畜牧業(yè)生產(chǎn)中的廣泛使用,使得糞腸球菌對不同抗菌藥物的耐藥性呈逐年上升趨勢,使其臨床治療變得棘手。同時,關(guān)于糞腸球菌耐藥機制的研究,以及整合子是否已經(jīng)參與到糞腸球菌多重耐藥性的傳播中,已經(jīng)成為亟待解決的關(guān)鍵問題。為此,本研究以動物源糞腸球菌作為對象,采用常規(guī)微生物學(xué)結(jié)合分子生物學(xué)方法,對分離株進(jìn)行鑒定,篩選多重耐藥菌株,檢測分離株中I類整合子的攜帶,查明其可變區(qū)所攜帶的耐藥基因盒,初步分析其參與傳播糞腸球菌多重耐藥性的機制,為控制糞腸球菌耐藥性的傳播提供理論依據(jù)。1.動物源糞腸球菌的分離、鑒定采用常規(guī)微生物學(xué)方法,對194份動物源糞便及肛拭中的可疑腸球菌進(jìn)行分離純化,對其形態(tài)學(xué)特性、培養(yǎng)特性、生理生化特性和分子生物學(xué)特性進(jìn)行鑒定,共分離鑒定到285株糞腸球菌,其中豬、牛、羊、馬、雞和蜣螂源糞腸球菌分別為49株、20株、174株、17株、21株、4株。2.動物源糞腸球菌耐藥表型及基因型的檢測采用CLSI(2014年)推薦的K-B擴散法,選擇8種臨床常用抗生素,檢測分析285株糞腸球菌的耐藥表型及多重耐藥性。結(jié)果表明:285株糞腸球菌對青霉素的耐藥率最高為92.28%,其次是鏈霉素82.11%、阿莫西林64.91%、紅霉素54.04%、四環(huán)素45.26%和環(huán)丙沙星40.00%,對呋喃妥因、氨芐西林表現(xiàn)為高敏。其中有265株表現(xiàn)出多重耐藥,5重耐藥糞腸球菌占31.39%(91/285),6重耐藥占26.67%(76/285)和4重耐藥占15.09%(43/285),7重耐藥及其以上耐藥占7.02%(20/285)。285株糞腸球菌對9種耐藥基因的PCR檢測結(jié)果表明,β-內(nèi)酰胺類耐藥基因tem檢出率最高達(dá)77.89%,其次是四環(huán)素類tetM基因為33.68%,喹諾酮類gyrA基因為37.54%和ParC34.74%。氨基糖苷類耐藥基因以aph(3')-III基因檢出率最高為22.46%,其次是aac(6')/aph2''基因為10.88%和ant(6')-I基因為8.42%,未檢出mef A基因。3.動物源糞腸球菌多重耐藥性與I類整合子的相關(guān)性研究采用PCR檢測結(jié)合序列分析的方法,對分離株中攜帶的I類整合子及其耐藥基因盒進(jìn)行檢測。結(jié)果表明,265株多重耐藥糞腸球菌的I類整合酶intI基因的陽性率為36.60%,3′-保守端qacE△1-sul 1基因檢出率為71.13%,擴增出31株耐藥基因盒插入?yún)^(qū),檢出率為31.96%,31株均攜帶有aadA2編碼氨基糖苷類耐藥基因盒,其與氨基糖苷類藥物的耐藥表型與基因型(aph(3')-III、aac(6')/aph2''、ant(6')-I)具有高度相關(guān)性,但并非唯一因素,未發(fā)現(xiàn)與其他抗生素耐藥機制相關(guān)的基因盒。研究結(jié)果表明,石河子周邊地區(qū)動物源糞腸球菌多重耐藥性現(xiàn)象較為嚴(yán)重,I類整合子已經(jīng)參與到其耐藥基因的傳播中。研究結(jié)果揭示本地區(qū)畜牧生產(chǎn)中應(yīng)加大對動物源細(xì)菌耐藥性的監(jiān)測,以避免I類整合子通過動物源產(chǎn)品將耐藥基因在動物與人之間傳遞。
【學(xué)位授予單位】：石河子大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S852.611
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本文編號：1247941