本文關(guān)鍵詞：副豬嗜血桿菌病原夾心ELISA檢測(cè)方法的建立及應(yīng)用

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【摘要】：為了建立一種準(zhǔn)確、快速的副豬嗜血桿菌病原夾心ELISA檢測(cè)方法,以副豬嗜血桿菌外膜蛋白P5的特異性單克隆抗體1E2作為捕獲抗體,兔抗副豬嗜血桿菌多克隆抗體作為檢測(cè)抗體,通過方陣滴定優(yōu)化夾心ELISA檢測(cè)方法最佳反應(yīng)條件,并對(duì)該檢測(cè)方法進(jìn)行特異性、敏感性驗(yàn)證以及臨床樣品的檢測(cè)應(yīng)用。結(jié)果顯示,該檢測(cè)方法中單克隆抗體1E2最佳包被濃度為3.434μg/m L,兔抗副豬嗜血桿菌多抗的最佳稀釋濃度為3.350μg/m L,用10 mg/m L明膠37℃封閉1 h優(yōu)于其他封閉液,辣根過氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔多體最佳使用濃度為1∶4 000。該檢測(cè)方法的特異性試驗(yàn)結(jié)果顯示可檢測(cè)出15個(gè)血清型的副豬嗜血桿菌病原,而與其他病原菌的檢測(cè)結(jié)果均為陰性。敏感性試驗(yàn)結(jié)果顯示該方法能夠檢測(cè)出副豬嗜血桿菌的最低菌落濃度為1×106cfu/m L。利用該檢測(cè)方法對(duì)臨床115份副豬嗜血桿菌可疑病料進(jìn)行檢測(cè)結(jié)果顯示可檢出83份陽(yáng)性樣品,檢出的陽(yáng)性樣品數(shù)高于細(xì)菌分離及PCR鑒定方法。上述結(jié)果表明所建立的副豬嗜血桿菌病原夾心ELISA檢測(cè)方法特異性強(qiáng)、敏感性好并可應(yīng)用到臨床樣品的檢測(cè)。
【作者單位】： 廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院動(dòng)物衛(wèi)生研究所廣東省畜禽疫病防治研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室廣東省獸醫(yī)公共衛(wèi)生實(shí)驗(yàn)室粵北生豬生產(chǎn)及疫病防控協(xié)同創(chuàng)新發(fā)展中心;仲愷農(nóng)業(yè)工程學(xué)院動(dòng)物科學(xué)系;
【基金】：廣東省公益研究與能力建設(shè)專項(xiàng)資金(2014B070706011;2015B070701015) 廣東省農(nóng)業(yè)領(lǐng)域科技計(jì)劃項(xiàng)目(2013B020307002) 廣州市新型畜禽疫病診斷試劑研發(fā)及產(chǎn)業(yè)化(201508020055) 廣州市重大民生專項(xiàng)(201300000066) 國(guó)家“十二五”科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(2015BAD12B02-4)
【分類號(hào)】：S858.28
【正文快照】： 副豬嗜血桿菌(Haemophilus parasuis,HPS)是一種多形態(tài)、煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)依賴型、不運(yùn)動(dòng)的革蘭氏陰性細(xì)小桿菌,屬于巴斯德桿菌科嗜血桿菌屬。該病原能引起豬的多發(fā)性漿膜炎、關(guān)節(jié)炎以及腦膜炎為主要特征的豬革拉澤氏病(Gl錬sser's disease)[1-2]。利用傳統(tǒng)的血清學(xué)

【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1239646