本文關(guān)鍵詞：H5N6亞型禽流感病毒HA-NA匹配性的初步探索

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【摘要】：為了研究血凝素和神經(jīng)氨酸酶的匹配性對H5N6亞型禽流感病毒生物學特性的影響,本研究采用流感病毒反向遺傳操作系統(tǒng),利用本課題組已建立的A/Goose/Guangdong/SH7/2013(H5N1)反向遺傳系統(tǒng)的6個內(nèi)部片段為骨架,A/Duck/Guangdong/673/2014(H5N6)(簡稱673)流感病毒提供HA基因,A/Goose/Guangdong/674/2014(H5N6)(簡稱674)提供HA基因和NA基因,重組了2株H5N6亞型禽流感病毒,分別命名為r673HA674NA和r674HA674NA,之后通過一系列體內(nèi)體外試驗評估HA-NA匹配性對病毒生物學特性的影響。測序結(jié)果表明:673HA與674HA存在14個氨基酸位點差異,但2個毒株HA的潛在糖基化位點都一致,之后用唾液酸受體結(jié)合能力試驗測定2個毒株的唾液酸受體結(jié)合能力,結(jié)果表明2株重組禽流感病毒都是以結(jié)合α-2,3唾液酸受體為主,其中r674HA674NA對α-2,3唾液酸受體結(jié)合能力強于r673HA674NA,但2株重組禽流感病毒對α-2,6唾液酸受體結(jié)合能力基本一致。體外蝕斑試驗、紅細胞解凝試驗和病毒在細胞中的增殖試驗結(jié)果表明:r673HA674NA重組禽流感病毒在MDCK細胞上形成的蝕斑顯著大于r674HA674NA,在豚鼠紅細胞解凝試驗中,r673HA674NA重組禽流感病毒HA孔數(shù)減少了11孔,而r674HA674NA重組禽流感病毒HA孔數(shù)僅減少了1孔,表明r673HA674NA重組禽流感病毒在豚鼠紅細胞中更易解離,并且在CEF細胞和MDCK細胞的增殖試驗中,r673HA674NA重組禽流感病毒在接毒后12-60h復制滴度都高于r674HA674NA,表明r673HA674NA重組禽流感病毒在CEF細胞和MDCK細胞的增殖也顯著好于r674HA674NA,這些結(jié)果都說明r673HA674NA重組禽流感病毒HA-NA的匹配性好于r674HA674NA重組禽流感病毒。在體內(nèi)試驗中,本研究測定了2株重組禽流感病毒對SPF雞和BALB/c小鼠的致病性,結(jié)果表明:r673HA674NA和r674HA674NA2株重組禽流感病毒對SPF雞的致病性都是強致病性,以105EID50/200u L攻毒后,SPF雞可在3天內(nèi)死亡,但HA-NA的匹配性好的r673HA674NA重組禽流感病毒比r674HA674NA重組禽流感病毒在雞群中的接觸傳播能力更強,r673HA674NA重組禽流感病毒同居組死亡率為72%,而r674HA674NA重組禽流感病毒同居組死亡率為57%,r673HA674NA重組禽流感病毒在攻毒后第2天和第4天檢測的拭子排毒量也更高,能在雞群中引起的危害更大。r673HA674NA重組禽流感病毒對BALB/c小鼠的MLD50更大,r673HA674NA重組禽流感病毒的MLD50為4.5,而r674HA674NA重組禽流感病毒MLD50為3.2,r673HA674NA重組禽流感病毒對小鼠的致病性更弱,在肺臟的復制滴度也更低,表明BALB/c小鼠并不是一個好的評價H5N6亞型禽流感病毒HA-NA匹配性的動物模型。這也與之前的報道研究結(jié)果相一致。其中可能的原因是在小鼠的呼吸道上皮細胞是以α-2,3唾液酸為主,而r674HA674NA重組禽流感病毒具備更強的結(jié)合α-2,3唾液酸受體的能力,使得病毒能夠更好的在呼吸道中增殖,對BALB/c小鼠產(chǎn)生更強的致病性。同時2株重組禽流感病毒HA的受體結(jié)合區(qū)域氨基酸的組成不同也可能是導致r674HA674NA重組禽流感病毒對BALB/c小鼠致病性更強的原因。
【學位授予單位】：華南農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S852.65

【參考文獻】

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1 楊志剛,陳阿琴,俞頌東,方維煥;禽流感病毒血凝素基因的研究進展[J];中國獸醫(yī)科技;2005年04期

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本文編號：1239630