本文關(guān)鍵詞：雙峰駝CYP2J基因的克隆與原核表達載體的構(gòu)建

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【摘要】：CYP2J酶主要參與機體內(nèi)源性物質(zhì)代謝,尤其是對花生四烯酸和亞油酸代謝發(fā)揮著重要作用。本試驗通過克隆CYP2J基因,構(gòu)建其原核表達載體,為蛋白層面深入研究雙峰駝CYP2J酶提供特異性抗體奠定基礎(chǔ)。從雙峰駝腎組織提取RNA,反轉(zhuǎn)錄后PCR擴增出雙峰駝CYP2J基因,膠回收純化后進行TA克隆,連接pMD18-T質(zhì)粒并轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α的感受態(tài)細胞中,提取質(zhì)粒進行HindⅢ和KpnⅠ雙酶切和PCR鑒定,并借助上述內(nèi)切酶雙酶切重組質(zhì)粒pMD18-T-CYP2J后,連接于經(jīng)同樣雙酶切處理的原核表達載體pET-32a,轉(zhuǎn)化于大腸桿菌DH5α細胞中,并經(jīng)HindⅢ和KpnⅠ雙酶切、PCR鑒定及測序鑒定重組質(zhì)粒。結(jié)果表明,在重組質(zhì)粒pMD18-T-CYP2J和pET-32a-CYP2J雙酶切電泳中均能得到約1500bp的特異性目的條帶及兩種質(zhì)粒的特異性條帶。以2種重組質(zhì)粒為模板進行PCR擴增后電泳均能得到約1500bp的CYP2J特異性條帶,測序結(jié)果與GenBank中公布的雙峰駝CYP2J預(yù)測序列的相似度為99%。由此可見,本試驗成功構(gòu)建了雙峰駝CYP2J基因原核表達載體pET-32a-CYP2J,為后續(xù)該基因的高效原核表達和蛋白層面的研究奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院農(nóng)業(yè)部動物疾病臨床診療技術(shù)重點實驗室;內(nèi)蒙古阿拉善駱駝科學(xué)研究所;內(nèi)蒙古駱駝研究院;
【基金】：國家自然科學(xué)基金項目(31560710)
【分類號】：S824
【正文快照】： CYP2J(Cytochrom e P450 2J subfamily)是存在于生物體內(nèi)的超家族酶系CYP的一個亞族,其表達部位不同于其他CYP亞族,主要表達于肝外系統(tǒng)[1]。CYP2J酶主要參與機體內(nèi)源性物質(zhì)的代謝,尤其對機體花生四烯酸和亞油酸的代謝作用突出�；ㄉ南┧峤�(jīng)CYP2J酶代謝,產(chǎn)生的EETs在保護血管

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中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 張立群;RT-qPCR檢測雙峰駝體內(nèi)CYP2J基因的分布與表達及其體外表達載體的構(gòu)建[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

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本文編號：1218462