本文關(guān)鍵詞：適應(yīng)H9亞型禽流感病毒增殖的MDCK懸浮細(xì)胞株的馴化及其生物學(xué)特性

  更多相關(guān)文章： MDCK細(xì)胞 無血清 單細(xì)胞懸浮 生物學(xué)特性 流感病毒受體

【摘要】：本研究通過篩選馴化的MDCK細(xì)胞獲得無血清懸浮生長MDCK細(xì)胞(命名為MDCK-sus),測定該細(xì)胞的比生長速率、細(xì)胞活力及細(xì)胞最大生長密度等生長特性,采用間接免疫熒光法和流式細(xì)胞儀檢測法比較母本MDCK細(xì)胞與MDCK-sus細(xì)胞流感病毒受體[唾液酸-α-2,3-半乳糖糖鏈?zhǔn)荏w(SAα2,3Gal)和唾液酸-α-2,6-半乳糖糖鏈?zhǔn)荏w(SAα2,6Gal)]的豐度,用熒光定量PCR檢測比較細(xì)胞中α-2,3唾液酸轉(zhuǎn)移酶(ST3Gals)基因與α-2,6唾液酸轉(zhuǎn)移酶(ST6Gals)基因表達(dá)水平的差異,通過測定流感病毒血凝HA效價比較母本MDCK細(xì)胞與MDCK-sus細(xì)胞對流感病毒的增殖能力。結(jié)果表明,經(jīng)馴化獲得的適合無血清懸浮培養(yǎng)的MDCK-sus細(xì)胞,細(xì)胞密度最高可達(dá)1ml 3.6×106個細(xì)胞,最大比生長速率可達(dá)1 d 0.56。MDCK-sus細(xì)胞表面流感病毒受體SAα2,3Gal的豐度明顯高于母體MDCK細(xì)胞,ST3Gal轉(zhuǎn)移酶基因表達(dá)水平也明顯高于母本MDCK細(xì)胞。MDCK細(xì)胞馴化后增殖禽流感病毒的能力增強(qiáng),其中H9亞型禽流感病毒AH1102株在MDCK-sus細(xì)胞中HA效價達(dá)到9lg2(25μl)。MDCK-sus細(xì)胞各種生長特性表明,其適于H9亞型禽流感的繁殖,可以為采用懸浮細(xì)胞培養(yǎng)禽流感疫苗的大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)提供技術(shù)支持。
【作者單位】： 江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院國家獸用生物制品工程技術(shù)研究中心;農(nóng)業(yè)部獸用生物制品工程技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;江蘇省動物重要疫病與人獸共患病防控協(xié)同創(chuàng)新中心;
【基金】：江蘇省農(nóng)業(yè)科技自主創(chuàng)新基金項目[CX(14)5045] 中央財政農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣基金項目[TG(14)067]
【分類號】：S852.65
【正文快照】： quantitive real-time PCR was adopted to analysis the difference in the mRNA levels of ST3Gals and ST6Gals,and the deter-mination of the influenza virus HA titer of coagulation was used to compare the parent and suspended MDCK cells.The ad-herence MDCK ce

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