本文關(guān)鍵詞：CpG佐劑對(duì)羊細(xì)粒棘球蚴Eg95抗原的免疫增強(qiáng)作用研究

  更多相關(guān)文章： pUC18-CpG CpG ODN 細(xì)粒棘球蚴病 免疫增強(qiáng)作用

【摘要】：細(xì)菌基因組DNA中存在具有免疫學(xué)刺激活性、以未甲基化胞嘧啶鳥(niǎo)嘌呤二核苷酸為核心的脫氧核苷酸序列,即CpG基序(CpG motif)。CpG ODN是指含有CpG基序的寡脫氧核苷酸。CpG ODN通過(guò)與胞內(nèi)受體的TLR9結(jié)合,活化pDC細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞等多種免疫細(xì)胞,可以作為一種潛在免疫增強(qiáng)劑,激活固有免疫應(yīng)答,促進(jìn)免疫細(xì)胞分泌產(chǎn)生IL-12、TNF-α、IFN-α/β和IFN-γ等細(xì)胞因子,促進(jìn)Th1型適應(yīng)性免疫反應(yīng)。人工合成的含有5’-GACGTT-3’堿基序列的CpG ODN對(duì)小鼠免疫系統(tǒng)具有強(qiáng)烈的免疫刺激作用。pUC18-CpG質(zhì)粒則是將含有10拷貝GACGTT的CpG基序克隆至pUC18載體中構(gòu)建而成,由本實(shí)驗(yàn)室保存。將人工合成的CpG ODN和pUC18-CpG質(zhì)粒分別刺激RAW264.7細(xì)胞,提取總RNA。以反轉(zhuǎn)錄的cDNA為模板,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測(cè)細(xì)胞因子和干擾素(IFN-β、IFN-γ、IL-1β、TNF-α、IL-12p40)的相對(duì)表達(dá)量。結(jié)果顯示,在CpG ODN或pUC18-CpG刺激下,除IFN-γ外,IFN-β、IL-1β、TNF-α、IL-12p40的相對(duì)表達(dá)量分別達(dá)到了17.22±1.33、64.56±3.87、4.45±0.25、79.50±4.87和11.17±1.34、10.61±0.69、5.56±0.41、51.17±2.56,差異顯著(P0.05);除TNF-α外,CpG ODN刺激IFN-β、IL-12p40和IL-1β相對(duì)表達(dá)量較pUC18-CpG刺激表達(dá)量差異更顯著(P0.05)。重組pET-32a-3Eg95大腸桿菌經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá),親和層析純化出重組蛋白3Eg95。重組蛋白分別與常規(guī)佐劑Quli-A、pUC18-CpG和CpG ODN配伍后,免疫小鼠。通過(guò)間接ELISA方法監(jiān)測(cè)各組抗體效價(jià)平均水平,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法測(cè)定體外刺激實(shí)驗(yàn)后細(xì)胞因子的相對(duì)表達(dá)量。結(jié)果顯示,pUC18-CpG組和CpG ODN組小鼠免疫后14天、28天以及42天ELISA抗體平均水平(OD450nm)分別為3.10±0.07、3.03±0.15、3.22±0.05和2.98±0.10、3.12±0.06、3.27±0.33,與Quli-A組抗體平均水平相比均差異均顯著(P0.05);CpG ODN組抗體平均水平略高于pUC18-CpG組,但差異不顯著(P≥0.05)。體外制備小鼠脾臟淋巴細(xì)胞,經(jīng)重組蛋白刺激后,pUC18-CpG組與CpG ODN組細(xì)胞IFN-β、IFN-γ和TNF-α的相對(duì)表達(dá)量分別為6.88±0.32、2.35±0.45、6.28±0.21和5.03±0.50、2.85±0.18、7.07±1.01,與Quli-A組相比差異均顯著(P0.05)。因此,在細(xì)胞免疫水平方面,pUC18-CpG和CpG ODN均能上調(diào)I型IFN和促炎性因子的表達(dá),具有誘導(dǎo)Th1型免疫反應(yīng)的特性;相對(duì)于常規(guī)佐劑Quli-A,pUC18-CpG和CpG ODN在體液免疫和細(xì)胞免疫方面對(duì)Eg95抗原都有顯著的免疫增強(qiáng)作用,CpG ODN的免疫增強(qiáng)作用略?xún)?yōu)于pUC18-CpG,兩者均可作為免疫佐劑,增強(qiáng)現(xiàn)有包蟲(chóng)病基因工程疫苗的免疫效果。
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：S852.4

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 王茹;謝印乾;沈志強(qiáng);繆曉青;;蜂膠的免疫增強(qiáng)作用及其在疫苗中的應(yīng)用[J];廣東畜牧獸醫(yī)科技;2006年06期

2 林志彬;;蜂膠的免疫增強(qiáng)作用[J];中國(guó)養(yǎng)蜂;1981年04期

3 高晨;李秀萍;郭昌春;于可響;;寡聚脫氧核苷酸對(duì)雞免疫增強(qiáng)作用的研究進(jìn)展[J];家禽科學(xué);2008年03期

4 王會(huì);何孔旺;;大腸桿菌熱敏腸毒素B亞基的原核表達(dá)及其免疫增強(qiáng)作用的探討[J];畜牧獸醫(yī)科技信息;2011年06期

5 代飛燕,項(xiàng)勛,段綱;中草藥的免疫增強(qiáng)作用[J];中獸醫(yī)學(xué)雜志;2004年06期

6 楊滿(mǎn)壽;;左旋咪唑的免疫增強(qiáng)作用及其應(yīng)用[J];青海畜牧獸醫(yī)雜志;1985年06期

7 郭旭東;刁其玉;史良;;中草藥對(duì)動(dòng)物的免疫增強(qiáng)作用[J];飼料工業(yè);2007年08期

8 李慧峰;李子平;單明輝;;歸參湯對(duì)免疫抑制小鼠的免疫增強(qiáng)作用試驗(yàn)[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2013年04期

9 王茹;謝印乾;沈志強(qiáng);繆曉青;;蜂膠的免疫增強(qiáng)作用及其在疫苗中的應(yīng)用[J];中國(guó)畜牧獸醫(yī);2007年02期

10 謝荔朋;;微生物胞外多糖對(duì)養(yǎng)殖動(dòng)物的免疫增強(qiáng)作用[J];福建畜牧獸醫(yī);2006年01期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 朱婭敏;張彥;張海波;;即食酵母粉對(duì)小鼠的免疫增強(qiáng)作用的研究[A];中國(guó)營(yíng)養(yǎng)學(xué)會(huì)老年?duì)I養(yǎng)分會(huì)第七次全國(guó)營(yíng)養(yǎng)學(xué)術(shù)交流會(huì)“營(yíng)養(yǎng)與成功老齡化”暨國(guó)家級(jí)繼續(xù)教育項(xiàng)目“神經(jīng)系統(tǒng)疾病醫(yī)學(xué)營(yíng)養(yǎng)治療”資料匯編[C];2010年

2 張小麗;惠愛(ài)武;陳萍;朱胤龍;陳瑞明;;稀針嗜蘭孢孔菌的免疫增強(qiáng)作用[A];中國(guó)藥理學(xué)會(huì)第十一次全國(guó)學(xué)術(shù)會(huì)議專(zhuān)刊[C];2011年

3 閆若潛;謝彩華;吳志明;李桂喜;張志凌;張健;劉梅芬;;重組雞白細(xì)胞介素-6(rChIL-6)對(duì)不同種類(lèi)疫苗免疫增強(qiáng)作用研究[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)禽病學(xué)分會(huì)第十五次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2010年

4 王金寶;任慧英;李俊;周順;;CpG對(duì)豬雞免疫增強(qiáng)作用的初步研究[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜傳染病學(xué)分會(huì)第六屆全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)暨第11次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2005年

5 王金寶;任慧英;李俊;周順;;CpG對(duì)豬雞免疫增強(qiáng)作用的初步研究[A];第六屆全國(guó)會(huì)員代表大學(xué)暨第11次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集（上）[C];2005年

6 楊紅振;徐蒿;李靖;白金葉;劉剛;程桂芳;;化合物L(fēng)G-1的免疫增強(qiáng)作用研究[A];第八屆全國(guó)生化藥理學(xué)術(shù)討論會(huì)暨第七屆Servier獎(jiǎng)?lì)C獎(jiǎng)大會(huì)會(huì)議摘要集[C];2003年

7 任曉峰;石娜;崔進(jìn);孟凡丹;李訓(xùn)良;李鵬沖;斯琴高娃;王超;王鑫;吳丹;李廣興;;豬IL-15對(duì)PRRSV GP5基因疫苗免疫增強(qiáng)作用的研究[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)畜牧獸醫(yī)生物技術(shù)學(xué)分會(huì)暨中國(guó)免疫學(xué)會(huì)獸醫(yī)免疫分會(huì)第八次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2010年

8 曹新鵬;陳書(shū)明;;IL-15的結(jié)構(gòu)特征及生物學(xué)功能[A];全國(guó)動(dòng)物生理生化第十一次學(xué)術(shù)交流會(huì)論文摘要匯編[C];2010年

9 張七斤;宋新宇;張和平;孟和畢力格;;乳酸桿菌成分對(duì)疫苗免疫增強(qiáng)作用的研究[A];第三屆第八次全國(guó)學(xué)術(shù)研討會(huì)暨動(dòng)物微生態(tài)企業(yè)發(fā)展戰(zhàn)略論壇論文集[C];2006年

10 李萍;賈寧;;新魚(yú)腥草素鈉免疫增強(qiáng)作用及其對(duì)雛雞免疫應(yīng)答的影響[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)獸醫(yī)病理學(xué)分會(huì)第十六次學(xué)術(shù)研討會(huì)、中國(guó)病理生理學(xué)會(huì)動(dòng)物病理生理專(zhuān)業(yè)委員會(huì)第十五次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2009年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 ;現(xiàn)代中藥成為抗腫瘤藥新寵[N];健康報(bào);2006年

2 沈中巧;阿斯匹林與老年病[N];民族醫(yī)藥報(bào);2008年

3 ;微量元素有利腫瘤防治[N];醫(yī)藥導(dǎo)報(bào);2006年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 王曉斌;卡介菌多糖核酸脂質(zhì)體的制備及其免疫增強(qiáng)作用與安全性研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

2 翟利娟;口服人參莖葉皂甙對(duì)雞的疫苗免疫增強(qiáng)作用的研究[D];浙江大學(xué);2011年

3 許小琴;IBD基因免疫和Rg_1-CpG對(duì)其免疫增強(qiáng)作用及機(jī)理的研究[D];吉林大學(xué);2005年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 陸穎;桑椹中的胰蛋白酶抑制劑及其對(duì)桑椹免疫增強(qiáng)作用影響的研究[D];江蘇大學(xué);2016年

2 董瑞凱;CpG佐劑對(duì)羊細(xì)粒棘球蚴Eg95抗原的免疫增強(qiáng)作用研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2016年

3 李金明;“菌毒克星”對(duì)動(dòng)物免疫增強(qiáng)作用的研究[D];福建農(nóng)林大學(xué);2004年

4 閆志玲;重組雞白細(xì)胞介素-6蛋白免疫增強(qiáng)作用研究[D];河南科技大學(xué);2013年

5 邢效瑞;榆耳（Gloeostereum incarnatum）發(fā)酵產(chǎn)物的抗菌及免疫增強(qiáng)作用研究[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

6 王遠(yuǎn)閣;四種中藥多糖免疫增強(qiáng)作用的研究[D];河南農(nóng)業(yè)大學(xué);2007年

7 袁明濤;免疫分子CD154對(duì)豬繁殖與呼吸綜合征病毒核酸疫苗的免疫增強(qiáng)作用研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2007年

8 張金萍;CpG-ODN免疫增強(qiáng)作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];暨南大學(xué);2003年

9 劉蕊娜;雞白細(xì)胞介素6基因的克隆及對(duì)新城疫LaSota疫苗的免疫增強(qiáng)作用研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

10 孫振紅;蘆薈提取物抑菌抗病毒及免疫增強(qiáng)作用的研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

，

本文編號(hào)：1215592