本文關(guān)鍵詞：HSPA1A和HSPA8在分娩中的功能研究

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【摘要】：參與分娩啟動(dòng)的機(jī)制和因素有很多,包括細(xì)胞凋亡、免疫炎癥調(diào)控因子和激素。然而,具體的作用機(jī)制尚不清楚。HSP70蛋白是熱休克蛋白家族中最重要的成員之一,有多種生物學(xué)功能。有報(bào)道稱HSP70直接或間接參與細(xì)胞凋亡,免疫炎癥反應(yīng)和激素刺激響應(yīng)。為了探索HSP70參與分娩啟動(dòng)的分子機(jī)制,我們通過轉(zhuǎn)染HSP70家族兩個(gè)代表性基因(HSPA1A和HSPA8)的人重組質(zhì)粒和其si-RNA于人羊膜上皮細(xì)胞(WISH細(xì)胞),過表達(dá)和敲低兩個(gè)基因。然后通過Western blot和RT-PCR分析,檢測(cè)幾個(gè)通路的標(biāo)志基因表達(dá)變化(細(xì)胞凋亡:BAX、BCL2和FAS;免疫炎癥反應(yīng):TLR4、TAP1和IL-8;雌激素刺激響應(yīng):ESR2)。結(jié)果表明在WISH細(xì)胞中,HSPA1A和HSPA8的過表達(dá)下調(diào)BAX、FAS、BAG2和ESR2,上調(diào)BCL2、TLR4、TAP1、CHIP和IL-8;HSPA1A和HSPA8表達(dá)的敲低上調(diào)BAX、FAS、BAG2和ESR2,下調(diào)BCL2、TLR4、TAP1、CHIP和IL-8。初步表明了HSPA1A和HSPA8有抗細(xì)胞凋亡的性質(zhì),并且參與免疫炎癥反應(yīng)以及雌激素信號(hào)通路。也即HSPA1A和HSPA8可能通過細(xì)胞凋亡、免疫炎癥反應(yīng)和雌激素刺激響應(yīng)參與分娩。另外,定量和Western blot的結(jié)果表明,基因表達(dá)水平變化最劇烈的是IL-8和ESR2。然后,通過使用ERK1/2磷酸化特異性抑制劑--PD98,059,處理WISH細(xì)胞,以及通過ELISA分析雌二醇(E2)的變化情況。結(jié)果表明,HSPA1A和HSPA8可以通過抑制ERK1/2的磷酸化調(diào)控ESR2的表達(dá),進(jìn)而影響雌激素刺激的響應(yīng)。最后,通過對(duì)妊娠15天的孕鼠腹腔注射LPS,構(gòu)建早產(chǎn)鼠模型。用HSPA1A的特異性抑制劑--PFT-μ處理LPS誘導(dǎo)的早產(chǎn)鼠模型,取小鼠胎膜進(jìn)行免疫組化。結(jié)果表明,當(dāng)僅用PFT-μ處理孕鼠時(shí),IL-8的表達(dá)下降而ESR2的表達(dá)上升;當(dāng)用PFT-μ處理LPS誘導(dǎo)的早產(chǎn)鼠模型時(shí),IL-8的表達(dá)上升而ESR2的表達(dá)下降。也即,HSPA1A的抑制可通過減少IL-8的表達(dá)和增加ESR2的表達(dá)抑制早產(chǎn)的發(fā)生。且以上所有體內(nèi)試驗(yàn)的結(jié)果和體外細(xì)胞試驗(yàn)的結(jié)果一致,這進(jìn)一步證明了HSPA1A和HSPA8在分娩中的作用�？傊�,HSPA1A和HSPA8可以通過刺激免疫炎癥反應(yīng)和促進(jìn)雌激素的刺激響應(yīng)來誘導(dǎo)分娩啟動(dòng)。也即,在分娩期間,HSPA1A和HSPA8超表達(dá)時(shí),HSPA1A和HSPA8可以通過刺激免疫炎癥反應(yīng),促進(jìn)雌激素的刺激響應(yīng),誘導(dǎo)分娩。HSPA1A和HSPA8的表達(dá)保持平衡,分娩可以順利的進(jìn)行;反之,HSPA1A和HSPA8表達(dá)失衡,則會(huì)導(dǎo)致早產(chǎn)等疾病的發(fā)生。
【學(xué)位授予單位】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S814

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1 耿俊楠;HSPA1A和HSPA8在分娩中的功能研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

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本文編號(hào)：1208069