本文關(guān)鍵詞：H3N2亞型豬流感病毒致病性試驗(yàn)及其反向遺傳操作系統(tǒng)的構(gòu)建

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【摘要】：豬擁有兩種唾液酸受體(SAα-2,3-Gal和SAα-2,6-Gal),使其可以被人或禽流感病毒感染,因此被看作產(chǎn)生重組病毒的“混合容器”。2009年H1N1亞型流感病毒(pdm/09)大暴發(fā),引起人類流感大流行,并引入到豬群中,目前,豬群中出現(xiàn)多種形式重組的豬流感病毒(Swine Influenza Virus, SIV)。因此,加強(qiáng)對(duì)SIV的監(jiān)控并了解其生物學(xué)特性對(duì)于防控人流感暴發(fā)具有重要的公共衛(wèi)生意義。為了闡明新型重組H3N2亞型SIVs對(duì)豬的致病性,本研究選用攜帶pdm09病毒的內(nèi)部基因(PB2、PB1、PA、NP和M)和季節(jié)性人流感病毒的表面基因(HA和NA)獲得的兩株H3N2亞型SIVs,即A/Swine/Guangxi /NNXD/2013和A/Swine/Guangxi/JG1/2014(分別簡(jiǎn)稱為NNXD和JG1),分別通過(guò)氣管接種途徑感染10只仔豬,每組4只,陰性對(duì)照2只。感染結(jié)果發(fā)現(xiàn)在感染后3天和5天的鼻拭子中均能檢測(cè)到病毒,說(shuō)明感染流感病毒后豬可以通過(guò)鼻腔進(jìn)行排毒。3 dpi和5 dpi剖殺發(fā)現(xiàn),兩組病毒都能在肺臟中復(fù)制,其中JG1組肺組織和肺洗液中的病毒含量更高(肺組織可達(dá)104PFU/mL,肺洗液中可達(dá)104.91PFU/mL),肺部病變方面,肺泡結(jié)構(gòu)破壞更嚴(yán)重,炎性反應(yīng)更明顯。為了探索NS基因在引起豬致病性差異方面的作用,本實(shí)驗(yàn)通過(guò)RT-PCR技術(shù)分別對(duì)NNXD株的8個(gè)基因片段及JG1株的NS片段進(jìn)行了特異性擴(kuò)增,再經(jīng)過(guò)一系列克隆技術(shù),將這些片段分別連接至pHW2000雙向表達(dá)載體上,成功構(gòu)建了具有感染性的重組質(zhì)粒。然后通過(guò)細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù),將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到293T和MDCK共培養(yǎng)細(xì)胞中,以期拯救出rgNNXD和rgNNXD-JG1/NS。
【學(xué)位授予單位】：廣西大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S852.65

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本文編號(hào)：1187610