【摘要】 目的：研究石家莊地區(qū)優(yōu)勢(shì)蠅種肥須亞麻蠅在地西泮作用下生長(zhǎng)發(fā)育的變化情況，探索多項(xiàng)實(shí)驗(yàn)指標(biāo)隨時(shí)間的規(guī)律性變化，積累生物學(xué)資料，從而為刑事調(diào)查中死后間隔時(shí)間的推斷和法醫(yī)昆蟲毒理學(xué)提供參考依據(jù)。方法：在河北醫(yī)科大學(xué)校園內(nèi)以動(dòng)物內(nèi)臟誘捕肥須亞麻蠅，帶回實(shí)驗(yàn)室在生化培養(yǎng)箱內(nèi)連續(xù)飼養(yǎng)至第三代，并以第三代作為母代觀察其在地西泮影響下的生長(zhǎng)發(fā)育。本實(shí)驗(yàn)使用家兔4只，隨機(jī)分為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組。對(duì)照組家兔經(jīng)耳緣靜脈注射生理鹽水1ml/kg，實(shí)驗(yàn)組家兔經(jīng)耳緣靜脈依次注射1/2倍，1倍，2倍致死劑量的地西泮，給藥30min后以重?fù)艏彝谜聿康姆椒▽?只家兔處死。取家兔肌肉組織分別保存，對(duì)照組標(biāo)記為M0，實(shí)驗(yàn)組依照給藥濃度從小到大依次標(biāo)記為M1、M2、M3。設(shè)定生化培養(yǎng)箱溫度為28℃，相對(duì)濕度為75％，光照周期為12h:12h。用新鮮豬肉誘肥須亞麻蠅產(chǎn)卵，產(chǎn)卵時(shí)間記為零時(shí)，將卵塊移至家兔的肌肉組織上飼養(yǎng)。幼蟲產(chǎn)出12小時(shí)后，每隔12小時(shí)留取標(biāo)本一次，每組每次留取10頭幼蟲，直至幼蟲達(dá)到離食期。將每組每次留取的10頭幼蟲用80℃熱水燙死，然后放入濃度為70％的酒精中保存。頭咽骨、體長(zhǎng)、體重的形態(tài)學(xué)觀察及測(cè)定從保存液中取出幼蟲標(biāo)本后，吸干表面液體，放在培養(yǎng)皿上，用大頭針在幼蟲腹部一側(cè)扎幾個(gè)小孔，放入10％的KOH溶液中消化內(nèi)部組織，24h后將幼蟲從KOH溶液中取出，放在培養(yǎng)皿上用鑷子輕輕按壓幼蟲，直至將體內(nèi)已消化的組織排出。幼蟲在清水中洗凈數(shù)遍后，在體式顯微鏡下分離出幼蟲頭節(jié)，然后將頭咽骨進(jìn)行對(duì)稱分離標(biāo)本依次用30％、50％、70％、80％、90％、95％、100％的酒精中逐級(jí)脫水，最后用二甲苯透明，顯微鏡下整姿后滴加加拿大樹膠封片，置于陰涼處風(fēng)干。用千分尺測(cè)量幼蟲的體長(zhǎng)，用電子天平測(cè)量幼蟲的體重。光學(xué)顯微鏡下觀察、拍照。利用計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng)對(duì)頭咽骨的口鉤及咽骨的面積、骨化面積和平均光密度等多項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行測(cè)定。各組頭咽骨的各項(xiàng)形態(tài)學(xué)指標(biāo)及體長(zhǎng)、體重均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，各組最大值或最小值間比較應(yīng)用單因素方差分析，分析結(jié)果由SPSS16.0軟件處理得出，以P<0.05為顯著性差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，應(yīng)用Excel程序作圖。結(jié)果:1幼蟲頭咽骨形態(tài)的變化1.1在恒定溫度（28℃）下隨著肥須亞麻蠅幼蟲的生長(zhǎng)發(fā)育，其頭咽骨的顏色逐漸由1齡期的淡黃色變?yōu)?齡期的棕褐色，最后變?yōu)?齡期的黑褐色，幾丁質(zhì)化程度不斷加強(qiáng)，骨化的范圍不斷增大。在三齡期可見點(diǎn)狀的附口骨。1.2在恒溫（28℃）條件下，M0、M1、M2、M3四組中肥須亞麻蠅幼蟲的口鉤面積隨著時(shí)間的延長(zhǎng)表現(xiàn)出階段性增加的特點(diǎn)，齡期更替時(shí)變化最明顯。當(dāng)幼蟲的口鉤面積達(dá)到最大值后，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)基本維持不變。12h時(shí),各組幼蟲口鉤面積最小，最小值之間有明顯差異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05，見Fig.6）。各組幼蟲口鉤面積的最大值之間無明顯差異，不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。其中M0于48h達(dá)最大口鉤面積，M1、M2、M3均于36h達(dá)最大口鉤面積。幼蟲口鉤骨化面積和口鉤平均光密度的變化趨勢(shì)與口鉤面積的變化趨勢(shì)相似，各組幼蟲口鉤骨化面積和平均光密度均隨著時(shí)間的延長(zhǎng)而增加，進(jìn)入三齡期達(dá)最大值后基本維持不變。12h時(shí)，各組幼蟲口鉤骨化面積和口鉤平均光密度均為最小，且各最小值之間有明顯差異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。各組最大值之間無明顯差異，不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05，見Fig.7，見Fig.8）。其中M0于96h到達(dá)最大口鉤骨化面積和口鉤平均光密度，M1于84h到達(dá)最大值,M2、M3均于72h達(dá)到最大值。1.3在恒溫（28℃）條件下，M0、M1、M2、M3組中幼蟲咽骨面積增長(zhǎng)趨勢(shì)與口鉤面積增長(zhǎng)趨勢(shì)相同，呈階段性增加，表現(xiàn)為在齡期內(nèi)增加速度平緩，在齡期更替時(shí)增長(zhǎng)速度顯著增快。當(dāng)咽骨面積達(dá)到最大值后，基本維持不變。12h時(shí)，各組幼蟲咽骨面積為最小，最小值之間有明顯差異（P<0.05），具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而各組咽骨面積最大值之間無明顯差異，不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05，見Fig.3）。其中M0于48h達(dá)最大咽骨面積，M1、M2、M3均于36h達(dá)最大咽骨面積。各組幼蟲咽骨骨化面積和咽骨平均光密度在1齡初期較小，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸增大，直至3齡期結(jié)束。各組幼蟲產(chǎn)出12h時(shí)咽骨骨化面積和咽骨平均光密度均為最小，且各最小值之間有明顯差異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。各組最大值之間無明顯差異，不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05，見Fig.4，見Fig.5）。其中M0于120h到達(dá)最大咽骨骨化面積和咽骨平均光密度，M1于96h到達(dá)最大值,M2、M3均于84h達(dá)到最大值。2幼蟲體長(zhǎng)體重的變化2.1在恒溫（28℃）條件下，M0、M1、M2、M3組中幼蟲體重隨著時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸增加，當(dāng)體重達(dá)到最大值后隨時(shí)間的延長(zhǎng)基本維持不變。各組幼蟲產(chǎn)出12h時(shí)開始采集標(biāo)本，在36h時(shí)，各組幼蟲平均體重出現(xiàn)顯著差異（P<0.05）,各組幼蟲到達(dá)最大體重的時(shí)間依次為96h,84h,72h,72h。各組幼蟲體重最大值之間有明顯差異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。其大小依次為M3>M2>M1>M0。幼蟲體長(zhǎng)的變化趨勢(shì)與體重的增長(zhǎng)趨勢(shì)相似，各組幼蟲體長(zhǎng)隨時(shí)間延長(zhǎng)平緩增長(zhǎng)，進(jìn)入三齡期達(dá)最大值后出現(xiàn)一定幅度的減小，之后基本維持不變。各組幼蟲于產(chǎn)出12h時(shí)開始采集標(biāo)本，在48h時(shí)，各組幼蟲平均體長(zhǎng)有明顯差異（P<0.05），各組幼蟲到達(dá)最大體長(zhǎng)的時(shí)間為96h,84h,72h,72h。各組幼蟲體長(zhǎng)最大值之間有明顯差異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。其大小依次為M3>M2>M1>M0。結(jié)論：1幼蟲體重、體長(zhǎng)隨時(shí)間的延長(zhǎng)呈現(xiàn)出平緩的增長(zhǎng)趨勢(shì)，當(dāng)達(dá)最大值后，基本保持不變。在四個(gè)實(shí)驗(yàn)組中，隨著地西泮藥物濃度的增大幼蟲達(dá)最大體長(zhǎng)、體重的時(shí)間逐漸縮短，說明地西泮對(duì)幼蟲的生長(zhǎng)發(fā)育有促進(jìn)作用。2幼蟲口鉤的面積、平均光密度和骨化面積隨時(shí)間的延長(zhǎng)而增加，齡期更替時(shí)變化顯著，但進(jìn)入三齡期達(dá)到最大值之后基本維持不變。地西泮對(duì)口鉤各項(xiàng)指標(biāo)的最大值沒有明顯影響。3幼蟲咽骨面積的變化趨勢(shì)與口鉤面積的變化趨勢(shì)相同。但咽骨的骨化面積和咽骨平均光密度在進(jìn)入三齡期后仍在穩(wěn)定持續(xù)的增長(zhǎng)，直至三齡期結(jié)束，因此咽骨的骨化面積和平均光密度更適合用于日齡的推測(cè)。地西泮對(duì)咽骨各項(xiàng)指標(biāo)的最大值沒有明顯影響。 

前     言 

通過研究我們發(fā)現(xiàn)蠅類幼蟲的頭咽骨能夠反映幼蟲在生長(zhǎng)發(fā)育過程中的變化規(guī)律，且與體長(zhǎng)體重等其它指標(biāo)相比，頭咽骨具有更好的穩(wěn)定性。王玲[1]曾對(duì)肥須亞麻蠅幼蟲的氣門及頭咽骨進(jìn)行了研究，她指出肥須亞麻蠅幼蟲咽骨的骨化面積和咽骨平均光密度均隨著幼蟲日齡的增加呈現(xiàn)出規(guī)律性的變化。既往的相關(guān)研究都可以刑事案件中死后間隔時(shí)間（PMI）的推斷提供理論依據(jù)。本次試驗(yàn)選用的肥須亞麻蠅是石家莊地區(qū)的優(yōu)勢(shì)蠅種。它分布廣泛，較易捕獲切繁殖力強(qiáng)，是法醫(yī)昆蟲學(xué)偵破案件中應(yīng)用較多的蠅種。試驗(yàn)以肥須亞麻蠅幼蟲的頭咽骨為研究對(duì)象，通過測(cè)定頭咽骨的面積、骨化面積、平均光密度來建立在地西泮影響下，各項(xiàng)指標(biāo)和幼蟲發(fā)育時(shí)間的關(guān)系，為利用法醫(yī)昆蟲學(xué)推斷死后間隔時(shí)間（PMI）提供有力的理論指導(dǎo)。
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1材料與方法 

1.1實(shí)驗(yàn)材料
在河北醫(yī)科大學(xué)校園內(nèi)以瘦豬肉誘捕肥須亞麻蠅，帶回實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)。蠅種鑒定按照《中國(guó)蠅類檢索表》系統(tǒng)進(jìn)行分類。將肥須亞麻蠅置于養(yǎng)蠅籠內(nèi)，飼以純凈水、奶粉、白砂糖（奶粉：糖＝1:1）。養(yǎng)蠅籠置于生化培養(yǎng)箱內(nèi)，溫度設(shè)定為 28℃，濕度為 75％，光照為 12:12 小時(shí)。每天換水一次，及時(shí)添加飼料，連續(xù)飼養(yǎng)至第三代成蠅作為母蠅開始試驗(yàn)。地西泮的最大注射劑量為50mg／60kg，根據(jù)“人和動(dòng)物按體表面積折算的等效最大用量”計(jì)算出家兔的致死劑量為 20mg／kg，根據(jù)此劑量分別設(shè)定家兔的注射劑量為1/2 倍致死劑量、1 倍致死劑量、2 倍致死劑量。

1.2肥須亞麻蠅的飼養(yǎng)
在 28℃恒溫條件下用瘦豬肉誘成蠅產(chǎn)卵，將切成2cm×2cm×2cm 的小塊，中間切開，置于 50ml 的燒杯中，放進(jìn)養(yǎng)蠅籠。每間隔30min 收集一次產(chǎn)有蟲卵的卵塊，將卵塊從養(yǎng)蠅籠內(nèi)取出并放入裝有不同濃度的家兔肌肉的燒杯中，標(biāo)明產(chǎn)卵時(shí)間。將這4 只燒杯置于盛有沙子的大燒杯中，保證幼蟲生長(zhǎng)過程中食物充足。將幼蟲標(biāo)本從70%的酒精保存液中取出，放在表面皿上。用大頭針在幼蟲腹部?jī)蓚?cè)扎數(shù)個(gè)小孔，然后放入 10%的KOH 溶液中消化。待幼蟲在KOH 消化液中充分消化 24 小時(shí)后，將幼蟲取出，再次放在表面皿上，使用鑷子輕壓幼蟲體部，將體內(nèi)已消化的組織排出。將幼蟲在純凈水中洗凈，依次放入 30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、100%的酒精中逐級(jí)脫水，每級(jí) 20min，然后將經(jīng)過 9 級(jí)脫水的幼蟲在 100%的酒精與二甲苯的混合液（比例為 1:1）浸泡 20min，放入二甲苯中透明。將透明好的幼蟲放置在載玻片上，滴加加拿大樹膠，在解剖鏡下將標(biāo)本整姿，蓋上蓋玻片，置于陰涼處風(fēng)干。

前言…………………………………9
1材料與方法………………………………9
1.1實(shí)驗(yàn)材料……………………………………9
1.2肥須亞麻蠅的飼養(yǎng)…………………10
2結(jié)果.……………………11
附圖.………………………15
3討論.……………………24
3.1地西泮對(duì)肥須亞麻蠅體長(zhǎng)體重的影響………………………………23

3.2地西泮對(duì)肥須亞麻蠅頭咽骨的影響………………………………25

4結(jié)論.…………………………26

3討     論 

3.1地西泮對(duì)肥須亞麻蠅體長(zhǎng)體重的影響
在 28℃的恒溫條件下，肥須亞麻蠅幼蟲的體重隨幼蟲生長(zhǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸增加，當(dāng)體重達(dá)最大值后隨幼蟲生長(zhǎng)時(shí)間延長(zhǎng)基本維持不變。M0、M1、M2、M3各組幼蟲在36h 時(shí)，各組幼蟲平均體重出現(xiàn)顯著差異（P<0.05）,各組幼蟲到達(dá)最大體重的時(shí)間依次為96h,84h,72h,72h。各組幼蟲體重最大值之間差異明顯，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。其大小依次為 M3>M2>M1>M0。在 28℃的恒溫條件下，肥須亞麻蠅幼蟲的體長(zhǎng)隨幼蟲生長(zhǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸增加，當(dāng)體長(zhǎng)達(dá)最大值后隨幼蟲生長(zhǎng)時(shí)間延長(zhǎng)出現(xiàn)一定幅度減小，之后基本維持不變。M0、M1、M2、M3各組幼蟲于孵出 12h 時(shí)開始采集標(biāo)本，在 48h 時(shí)，各組幼蟲平均體長(zhǎng)出 現(xiàn) 顯 著 差 異 （ P<0.05 ）， 各 組 幼 蟲 到 達(dá) 最 大 體 長(zhǎng) 的 時(shí) 間 為96h,84h,72h,72h。各組幼蟲體長(zhǎng)最大值之間差異明顯，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。其大小依次為 M3>M2>M1>M0。由以上數(shù)據(jù)可知，地西泮增快了肥須亞麻蠅幼蟲的生長(zhǎng)速度，同時(shí)增大了體長(zhǎng)體重的最大值，且隨著地西泮濃度越大，幼蟲體長(zhǎng)體重達(dá)最大值的時(shí)間越短，極值越大。

3.2地西泮對(duì)肥須亞麻蠅頭咽骨的影響
12h 時(shí)，四個(gè)實(shí)驗(yàn)組幼蟲的口鉤面積最小，各組的最小值之間差異明顯，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05，見Fig.1）。其中 M0于48h 達(dá)最大值、M1、M2、M3均于 36h 達(dá)最大值。由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知地西泮使口鉤面積達(dá)到最大值的時(shí)間縮短，也就是說地西泮增快了幼蟲的生長(zhǎng)發(fā)育速率�？阢^骨化面積及口鉤平均光密度變化趨勢(shì)相似，其中 M0于96h 達(dá)最大值、M1于84h達(dá)最大值、M2、M3均于 72h 達(dá)最大值。說明地西泮的作用濃度與肥須亞麻蠅幼蟲的生長(zhǎng)發(fā)育速度呈正相關(guān)。同時(shí)我們看到，上述各實(shí)驗(yàn)組中的口鉤面積、口鉤骨化面積、口鉤平均光密度各自的最大值并沒有因?yàn)榈匚縻饔脻舛鹊牟煌霈F(xiàn)明顯的差異，這說明地西泮對(duì)肥須亞麻蠅幼蟲口鉤各項(xiàng)指標(biāo)的最大值沒有產(chǎn)生影響。
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結(jié)     論

1  地西泮增加了肥須亞麻蠅幼蟲生長(zhǎng)發(fā)育的速度，在一定范圍內(nèi)，隨藥物濃度的增加，生長(zhǎng)速度增快程度越大。同時(shí)地西泮增加了幼蟲體長(zhǎng)、體重的最大值，筆耕文化推薦期刊，由此可知幼蟲體長(zhǎng)、體重穩(wěn)定性差，不宜作為死后間隔時(shí)間推斷的觀測(cè)指標(biāo)。
2  地西泮對(duì)幼蟲頭咽骨各觀測(cè)指標(biāo)的最大值沒有影響，說明肥須亞麻蠅頭咽骨的穩(wěn)定性好，是推斷死后間隔時(shí)間的可靠依據(jù)。
3  肥須亞麻蠅幼蟲在進(jìn)入 3  齡期之后，口鉤面積、口鉤骨化面積、口鉤平均光密度、咽骨面積快速達(dá)到最大值后基本維持不變，而咽骨的骨化面積、平均光密度進(jìn)入3 齡期后仍持續(xù)增長(zhǎng)直至 3 齡期末。因此，咽骨的骨化面積和咽骨平均密度更適合幼蟲日齡的推算，也更適合作為死后間隔時(shí)間推斷的觀測(cè)指標(biāo)。 
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