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玉米赤霉烯酮降解菌的篩選鑒定及降解特性研究

發(fā)布時(shí)間:2017-11-08 03:07

  本文關(guān)鍵詞:玉米赤霉烯酮降解菌的篩選鑒定及降解特性研究


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【摘要】:由鐮刀菌產(chǎn)生的玉米赤霉烯酮(ZEN)在世界各地的糧食作物及產(chǎn)品中普遍存在,是對(duì)人和動(dòng)物危害最為嚴(yán)重的霉菌毒素之一。傳統(tǒng)的物理和化學(xué)脫毒方法存在一定的缺陷,因此微生物脫毒方法成為近年來國內(nèi)外研究的熱點(diǎn)。為了篩選高效降解ZEN的微生物,本試驗(yàn)一選取各種動(dòng)物腸道食糜或糞便、霉變的飼料和食品、各地區(qū)不同環(huán)境的土壤等作為樣本,利用微生物去毒法,以ZEN作為唯一碳源和能源依次進(jìn)行初篩、復(fù)篩ZEN降解菌,菌液毒素終質(zhì)量濃度為5μg/mL,并通過高效液相方法檢測(cè)所分離到的細(xì)菌對(duì)ZEN毒素的降解能力。結(jié)果顯示:14株菌株具有ZEN降解能力,降解率在8.3%-87.1%之間,其中一株從石油污染的土壤中分離篩選并命名為紅球菌SYA13的菌株,與ZEN培養(yǎng)基共孵育72h能高效降解ZEN,降解率高達(dá)87.1%,明顯高于其他菌株。通過對(duì)SYA13菌株進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)學(xué)、生理生化鑒定以及分子生物學(xué)鑒定,可確定SYA13菌株為紅球菌,命名為Rhodococcus sp.SYA13(登錄號(hào)KP060098.1)。為了初步了解該菌株的降解特性,本試驗(yàn)二將菌株SYA13的發(fā)酵培養(yǎng)48h,取發(fā)酵液對(duì)其進(jìn)行組分分離,分別與ZEN共孵育24h,通過HPLC檢測(cè),結(jié)果顯示,菌體細(xì)胞、胞內(nèi)提取物、發(fā)酵上清液的降解率分別為63.9%,43.7%和35.0%,初步鑒定其降解活性成分可能為胞內(nèi)酶。為了研究該菌的安全性以及對(duì)動(dòng)物ZEN中毒癥狀是否有緩解作用,本試驗(yàn)三將試驗(yàn)小鼠隨機(jī)分成4組,每組10只,第一組:對(duì)照組,第二組:ZEN毒素處理組,第三組:SYA13處理組,第四組:ZEN+SYA13組,腹腔注射給藥,每次劑量為0.2mL,每天2次,連續(xù)15d,試驗(yàn)結(jié)束后空腹摘小鼠眼球采血,做血常規(guī)檢測(cè),分離血清做血液生化指標(biāo)測(cè)定,結(jié)果顯示,試驗(yàn)期間小鼠無死亡病例,存活率為100%;ZEN組白細(xì)胞總數(shù)(WBC)較ZEN+SYA13組差異顯著(p0.05),ZEN組與SYA13組比較差異顯著(p0.05);ZEN組紅細(xì)胞總數(shù)(RB3C)雖高于對(duì)照組但低于SYA13組和ZEN+SYA13組,ZEN組血紅蛋白(HGB)與對(duì)照組比較差異顯著(p0.05);ZEN組的血小板總數(shù)(PLT)較對(duì)照組高,SYA13組和ZEN+SYA13組的血小板總數(shù)(PLT)均低于對(duì)照組;ZEN組的ALT指標(biāo)高于對(duì)照組數(shù)值,差異顯著(p0.05),ZEN+SYA13組ALT指標(biāo)與ZEN組比較,差異顯著(p0.05):ZEN+SYA13組AST指標(biāo)低于其他三組,且與對(duì)照組、ZEN組均差異顯著(p0.05);ZEN組的TP指標(biāo)和ALB指標(biāo)數(shù)值均低于其他三組,與ZEN+SYA13組差異顯著(p0.05);ZEN組的尿素氮、UA均高于其他三組,與ZEN+SYA13組比較差異顯著(p0.05);上述結(jié)果表明,ZEN組對(duì)小鼠血液有一定的毒性,且對(duì)肝臟和腎臟具有一定的損傷,菌株SYA13發(fā)酵液在一定程度上可緩解玉米赤霉烯酮對(duì)小鼠血液、肝臟、腎臟的損傷。
【學(xué)位授予單位】:沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2016
【分類號(hào)】:S859.87

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本文編號(hào):1155302

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