本文關(guān)鍵詞：牛副流感病毒3型實時熒光定量RT-PCR檢測方法的建立

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【摘要】：本試驗為建立一種特異性強、敏感性高的檢測牛副流感病毒3型(BPIV3)的實時熒光RT-PCR方法。本試驗根據(jù)GenBank上發(fā)表的牛副流感病毒3型基因序列,進行對比分析,設(shè)計合成了能特異性擴增BPIV3的1對引物及1條探針。制備標準陽性質(zhì)粒DNA模板,對實時熒光定量RT-PCR反應(yīng)參數(shù)和反應(yīng)條件進行優(yōu)化,并制備實時熒光RT-PCR標準曲線,評價所建立的實時熒光定量RT-PCR反應(yīng)體系的敏感性、特異性、重復(fù)性,并依賴本試驗建立的BPIV3實時熒光定量RT-PCR方法對11份臨床樣品進行檢測。結(jié)果表明,在引物濃度400nmol/L、探針濃度300nmol/L、退火溫度58℃時所建立的本實時熒光定量RT-PCR方法達到最佳效果。本方法可以特異的檢測BPIV3,并能與巴氏桿菌、牛傳染性鼻氣管炎病毒、牛支原體、小反芻獸疫病毒、鏈球菌、綿羊痘病毒、山羊痘病毒、羊口瘡病毒相區(qū)分。另外,本試驗建立的方法Ct值的變異系數(shù)均小于1%,BPIV3的最小檢出量為1.00×102 copies/μL。表明所建立的實時熒光RT-PCR方法具有較強的穩(wěn)定性、較高的敏感性。運用所建立的實時熒光RT-PCR方法檢測臨床樣品,可以快速檢測BPIV3。
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S852.653

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