本文關(guān)鍵詞：表達鼠CXCL13重組狂犬病病毒的構(gòu)建及免疫原性的研究

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【摘要】：狂犬病(Rabies)是一種嚴重危害人和動物的烈性傳染病,分布在全世界約150個國家。到目前為止,接種狂犬病毒疫苗仍是該病最簡單有效的預(yù)防、控制方法,因此,開發(fā)安全、高效低廉的新型狂犬病疫苗仍具有重要意義。趨化因子CXCL13可以通過與CXCR5受體結(jié)合,趨化B淋巴細胞和濾泡輔助T細胞(T follicular helper cell,T_(FH))細胞進入二級淋巴濾泡,促使生發(fā)中心(Germinal center,GC)和記憶B細胞和高親和力抗體的產(chǎn)生。鑒于CXCL13在體液免疫過程中的重要作用,我們構(gòu)建了表達鼠CXCL13蛋白的重組狂犬病病毒LBNSE-CXCL13,通過小鼠感染狂犬病毒模型來探究CXCL13在狂犬病毒感染過程中作用和機制。具體研究結(jié)果如下:1.重組狂犬病病毒LBNSE-CXCL13在BSR和NA細胞上生長特性均與親本毒株LBNSE相似,無顯著差異;2.腦內(nèi)接種4×106 FFU LBNSE-CXCL13病毒,小鼠體重變化率與LBNSE-GM-CSF組相似,與LBNSE組無顯著差異,實驗過程中小鼠無明顯臨床癥狀和死亡現(xiàn)象;3.肌肉免疫1×106 FFU狂犬病病毒,LBNSE-CXCL13組小鼠2-6周抗體平均水平明顯較LBNSE-GM-CSF和LBNSE組高,且三組第9周抗體水平均高于0.5IU/ml;4.與LBNSE相比,LBNSE-CXCL13對小鼠體外骨髓DC激活明顯,但不能顯著激活體內(nèi)血液和淋巴結(jié)中DC,且明顯低于LBNSE-GM-SCF組;5.免疫小鼠后,在第7、14天LBNSE-CXCL13較LBNSE-GM-CSF和LBNSE能明顯提高對T_(FH)和GC B細胞的激活;6.免疫后第2周肌肉攻毒50 LD50 CVS-24,發(fā)現(xiàn)LBNSE-CXCL13能顯著提高小鼠的保護率(95%),明顯高于LBNSE組(50%)及LBNSE-GM-CSF組(70%)。綜上所述,本研究說明表達小鼠CXCL13的重組狂犬病病毒LBNSE-CXCL13可明顯刺激機體持續(xù)產(chǎn)生高水平的中和抗體,有望成為一株高效的狂犬病疫苗。
【關(guān)鍵詞】：狂犬病 重組狂犬病病毒 趨化因子CXCL13 濾泡輔助T細胞 疫苗
【學(xué)位授予單位】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S852.65
【目錄】：

• 摘要6-7
• Abstract7-9
• 縮略語表(Abbreviation）9-11
• 1 文獻綜述11-22
• 1.1 狂犬病概述11
• 1.2 狂犬病病原學(xué)11-12
• 1.3 狂犬病病毒的致病機制和病理變化12-13
• 1.4 狂犬病的流行病學(xué)和防控13-14
• 1.5 狂犬病的預(yù)防和治療14-15
• 1.6 狂犬病病毒的反向遺傳學(xué)15-16
• 1.7 狂犬病毒疫苗的研究進展16-18
• 1.7.1 傳統(tǒng)狂犬病毒疫苗16-17
• 1.7.2 新型狂犬病毒疫苗17-18
• 1.8 生發(fā)中心18-19
• 1.9 趨化因子CXCL1319-20
• 1.10 T_(FH)細胞及其表面分子20-22
• 2.目的與意義22-23
• 3 實驗材料與方法23-38
• 3.1 實驗材料23-26
• 3.1.1 細胞和病毒23
• 3.1.2 載體與質(zhì)粒23
• 3.1.3 主要試劑23-24
• 3.1.4 相關(guān)試劑及配制24-25
• 3.1.5 主要儀器25
• 3.1.6 實驗動物及手術(shù)器械25-26
• 3.2 實驗方法26-38
• 3.2.1 鼠PMBCs的分離及CXCL13基因的克隆26-29
• 3.2.2 LBNSE-CXCL13感染性克隆的構(gòu)建29-31
• 3.2.3 LBNSE-CXCL13的拯救31
• 3.2.4 LBNSE-CXCL13感染性克隆的鑒定31-32
• 3.2.5 LBNSE-CXCL13的擴增32-33
• 3.2.6 LBNSE-CXCL13毒價的測定33
• 3.2.7 LBNSE-CXCL13在細胞上的生長特性33
• 3.2.8 LBNSE-CXCL13體外bmDC激活情況33-34
• 3.2.9 LBNSE-CXCL13感染小鼠后DC、T_(FH)和GC B細胞激活檢測34-36
• 3.2.10 LBNSE-CXCL13對小鼠致病性檢測36
• 3.2.11 LBNSE-CXCL13免疫小鼠后中和抗體檢測36
• 3.2.12 LBNSE-CXCL13對小鼠保護率檢測36
• 3.2.13 FAVN法檢測狂犬病病毒中和抗體36-38
• 4 結(jié)果與分析38-52
• 4.1 LBNSE-CXCL13感染性克隆的構(gòu)建38-39
• 4.2 LBNSE-CXCL13的檢測39-40
• 4.3 LBNSE-CXCL13體外生長特性40
• 4.4 動物實驗40-44
• 4.4.1 LBNSE-CXCL13對小鼠致病性檢測40-41
• 4.4.2 LBNSE-CXCL13免疫小鼠后中和抗體水平檢測41-43
• 4.4.3 LBNSE-CXCL13對小鼠的保護率檢測43-44
• 4.5 LBNSE-CXCL13對小鼠DC的激活檢測44-49
• 4.5.1 LBNSE-CXCL13對小鼠bmDC的激活檢測44-46
• 4.5.2 LBNSE-CXCL13對小鼠體內(nèi)DC的激活檢測46-49
• 4.6 LBNSE-CXCL13對小鼠T_(FH)和GC B細胞激活檢測49-52
• 5 討論52-55
• 6 結(jié)論55-56
• 參考文獻56-65
• 致謝65

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本文編號：1123756