本文關(guān)鍵詞：柔嫩艾美耳球蟲子孢子酵母雙雜交cDNA文庫(kù)的構(gòu)建

  更多相關(guān)文章： 柔嫩艾美耳球蟲 子孢子 酵母雙雜交cDNA文庫(kù) 同源重組

【摘要】：為了篩選柔嫩艾美耳球蟲子孢子入侵相關(guān)的蛋白,利用酵母雙雜交體系構(gòu)建了柔嫩艾美耳球蟲子孢子酵母雙雜交cDNA文庫(kù)。提取純化的子孢子總RNA,經(jīng)MMLV-RT反轉(zhuǎn)錄合成cDNA第一鏈后,利用LD-PCR擴(kuò)增合成雙鏈cDNA(ds cDNA),dscDNA經(jīng)純化柱CHROMA SPINT+TE-400 Columns純化剔除小于200 bp的片段。將純化后dscDNA、pGADT7-Rec及Carrier DNA共轉(zhuǎn)化到已經(jīng)制備好的酵母感受態(tài)細(xì)胞Y187中,dscDNA與pGADT7-Rec以同源重組的方式在細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行連接,經(jīng)過缺陷性培養(yǎng)基(SD/-Leu)的篩選得到酵母雙雜交cDNA文庫(kù)。結(jié)果顯示,構(gòu)建的柔嫩艾美耳球蟲子孢子酵母雙雜交cDNA文庫(kù)的轉(zhuǎn)化率為4.33×105/μg pGADT7-Rec,文庫(kù)滴度為3.62×107 cfu/m L。隨機(jī)挑取32個(gè)單克隆進(jìn)行PCR檢測(cè),插入片段大小為200~2000bp,重組率為93.75%,并以該文庫(kù)作為模板,用柔嫩艾美耳球蟲5對(duì)特異性引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增,獲得了這5個(gè)基因片段。結(jié)果表明成功構(gòu)建了柔嫩艾美耳球蟲子孢子酵母雙雜交cDNA文庫(kù),為進(jìn)一步篩選和研究球蟲入侵互作蛋白奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所農(nóng)業(yè)部動(dòng)物寄生蟲學(xué)重點(diǎn)開放實(shí)驗(yàn)室;江蘇省動(dòng)物重要疫病與人獸共患病防控協(xié)同創(chuàng)新中心;上海師范大學(xué)生命與環(huán)境科學(xué)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 柔嫩艾美耳球蟲 子孢子 酵母雙雜交cDNA文庫(kù) 同源重組
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(31272557,31572266) 農(nóng)業(yè)部中央級(jí)公益性科研院所項(xiàng)目(2015JB10)
【分類號(hào)】：S852.723
【正文快照】： 環(huán)境科學(xué)學(xué)院,上海200234;3.江蘇省動(dòng)物重要疫病與人獸共患病防控協(xié)同創(chuàng)新中心,揚(yáng)州225009)雞球蟲病是由幾種艾美耳球蟲(Eimeria)寄生于雞腸道并在繁殖過程中嚴(yán)重?fù)p害腸道組織細(xì)胞而引起的一種全球性寄生蟲病,給養(yǎng)雞業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。集約化養(yǎng)雞場(chǎng)尤其為雞球蟲的生存和

【相似文獻(xiàn)】

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