本文關(guān)鍵詞：飼用乳酸菌的篩選及其抑菌功能物質(zhì)的初步研究

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【摘要】：飼料在運(yùn)輸、儲(chǔ)存過(guò)程中容易攜帶大腸桿菌、沙門氏菌,單增李斯特菌等病原微生物,這些病原微生物隨著飼料進(jìn)入動(dòng)物體內(nèi),會(huì)引起動(dòng)物腸道傳染病,對(duì)動(dòng)物的健康構(gòu)成嚴(yán)重威脅。解決這一問(wèn)題目前使用最廣泛的仍然是抗生素。然而隨著抗生素的應(yīng)用,細(xì)菌耐藥性日益普遍,同時(shí),抗生素的藥物殘留問(wèn)題也逐漸引起了人們的注意。世界許多畜牧發(fā)達(dá)國(guó)家和地區(qū)限制抗生素的使用,研究和開(kāi)發(fā)綠色飼料添加劑產(chǎn)品,已經(jīng)成為世界性的研究課題。篩選獲得具有抑菌功能的,耐酸耐膽鹽和耐飼料加工的飼用乳酸菌,并確定它的抑菌功能物質(zhì)對(duì)開(kāi)發(fā)綠色飼料添加劑具有重要的實(shí)用價(jià)值。從飼料原料中分離得到能夠抑制大腸桿菌生長(zhǎng)的乳酸菌,排除發(fā)酵液中有機(jī)酸和H2O2的干擾,初步確定4株具有較強(qiáng)抑菌活性的飼用乳酸菌。進(jìn)一步通過(guò)耐酸、耐膽鹽和耐熱實(shí)驗(yàn)將乳酸菌R16確定為目標(biāo)菌,經(jīng)形態(tài)學(xué)、API和16S rDNA基因序列分析鑒定該菌株為乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici),并將其命名為乳酸片球菌R16(Pediococcus acidilactici R16)。通過(guò)超濾、陰離子交換色譜、凝膠過(guò)濾色譜和反相高效液相色譜(reversed-phase high performance liquid,RP-HPLC)從乳酸片球菌R16發(fā)酵液中分離抑制大腸桿菌的活性物質(zhì),獲得一種對(duì)大腸桿菌具有抑制作用的乳酸菌素,通過(guò)液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(liquid chromatography-mass spectrometry,LC-MS)初步鑒定該乳酸菌素的分子量大小為705.63Da,等電點(diǎn)為3.58,氨基酸序列為ENGEEE。通過(guò)化學(xué)合成的方法,確認(rèn)該乳酸菌素對(duì)大腸桿菌具有抑制作用,將其命名為乳酸菌素R16。對(duì)乳酸菌素R16進(jìn)行生物學(xué)特性研究,發(fā)現(xiàn)其在pH 3.0~5.0時(shí),抑菌效果最好,在pH 6.0~8.0時(shí),抑菌活性逐漸降低。在≤80℃中處理30 min,乳酸菌素R16的抑菌活性幾乎不變,在90、100、121℃處理30、30、15 min,其抑菌活性分別損失了21.95%、49.47%和59.98%。乳酸菌素R16對(duì)蛋白酶敏感性低,經(jīng)蛋白酶處理后,其抑菌活性無(wú)明顯變化。對(duì)抑菌譜的測(cè)定實(shí)驗(yàn)表明,乳酸菌素R16對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌具有較強(qiáng)的抑制作用,對(duì)革蘭氏陰性菌抑制效果不明顯,且對(duì)大腸桿菌和單增李斯特菌的最小抑菌濃度為6.40 mg?mL~(-1),對(duì)金黃色葡萄球菌的最小抑菌濃度為3.40 mg?mL~(-1)。乳酸片球菌R16和乳酸菌素R16能夠有效抑制豆粕中大腸桿菌的增長(zhǎng),且能夠殺死17.20%和33.44%豆粕中的大腸桿菌。乳酸菌素R16對(duì)于釀酒酵母和植物乳桿菌具有一定的增殖作用。乳酸菌素R16對(duì)過(guò)氧化氫、羥自由基、DPPH?自由基和超氧陰離子具有一定的清除能力,清除率分別為25.65%、70.13%、79.42%和10.11%。
【關(guān)鍵詞】：乳酸片球菌 乳酸菌素 大腸桿菌 綠色飼料添加劑
【學(xué)位授予單位】：江南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S816
【目錄】：

• 摘要3-4
• Abstract4-8
• 第一章 緒論8-14
• 1.1 飼料安全8-9
• 1.1.1 病原微生物與飼料安全8
• 1.1.2 抗生素與飼料安全8
• 1.1.3 綠色飼料添加劑與飼料安全8-9
• 1.2 乳酸菌研究進(jìn)展9-10
• 1.2.1 乳酸菌的定義與分類9
• 1.2.2 乳酸菌在動(dòng)物養(yǎng)殖上的作用9-10
• 1.3 乳酸菌素研究進(jìn)展10-12
• 1.3.1 乳酸菌素概述10-11
• 1.3.2 乳酸菌素的分類11
• 1.3.3 乳酸菌素的應(yīng)用11-12
• 1.4 立題背景與意義12-13
• 1.5 研究?jī)?nèi)容13-14
• 第二章 材料與方法14-22
• 2.1 材料14
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)原料14
• 2.1.2 主要試劑及材料14
• 2.2 儀器設(shè)備14-15
• 2.3 產(chǎn)乳酸菌素乳酸菌的篩選與鑒定15-17
• 2.3.1 培養(yǎng)基制備15
• 2.3.2 乳酸菌的篩選15
• 2.3.3 產(chǎn)乳酸菌素乳酸菌的篩選15-16
• 2.3.4 產(chǎn)乳酸菌素乳酸菌的復(fù)篩16
• 2.3.5 產(chǎn)乳酸菌素且能夠耐酸耐膽鹽乳酸菌的篩選16
• 2.3.6 產(chǎn)細(xì)菌素乳酸菌的鑒定16-17
• 2.4 抑菌活性物質(zhì)的分離純化及鑒定17-18
• 2.4.1 乳酸菌素效價(jià)分析17
• 2.4.2 超濾17
• 2.4.3 陰離子交換色譜17
• 2.4.4 凝膠過(guò)濾色譜17-18
• 2.4.5 半制備RP-HPLC18
• 2.4.6 LC-MS鑒定18
• 2.4.7 合成驗(yàn)證18
• 2.5 抑菌活性物質(zhì)的生物學(xué)特性研究18-22
• 2.5.1 pH對(duì)抑菌活性物質(zhì)的影響18
• 2.5.2 溫度對(duì)抑菌活性物質(zhì)的影響18
• 2.5.3 酶處理對(duì)抑菌活性物質(zhì)的影響18-19
• 2.5.4 抑菌活性物質(zhì)的抑菌譜19
• 2.5.5 抗菌活性測(cè)定19
• 2.5.6 抑菌活性物質(zhì)對(duì)益生菌的影響19
• 2.5.7 抑菌活性物質(zhì)的抗氧化能力19-21
• 2.5.8 乳酸片球菌R16在豆粕中的應(yīng)用21
• 2.5.9 乳酸菌素R16在豆粕中的應(yīng)用21-22
• 第三章 結(jié)果與討論22-39
• 3.1 產(chǎn)乳酸菌素乳酸菌的篩選與鑒定22-27
• 3.1.1 產(chǎn)乳酸菌素乳酸菌的篩選22
• 3.1.2 產(chǎn)乳酸菌素乳酸菌的復(fù)篩22-23
• 3.1.3 產(chǎn)乳酸菌素且能夠耐酸耐膽鹽耐高溫乳酸菌的篩選23-24
• 3.1.4 產(chǎn)乳酸菌素乳酸菌的鑒定24-26
• 3.1.5 系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)構(gòu)建26
• 3.1.6 小結(jié)26-27
• 3.2 活性物質(zhì)的分離純化及鑒定27-32
• 3.2.1 超濾27
• 3.2.2 陰離子交換色譜27-28
• 3.2.3 凝膠過(guò)濾色譜28-29
• 3.2.4 半制備RP-HPLC29-30
• 3.2.5 LC-MS30-31
• 3.2.6 合成驗(yàn)證31
• 3.2.7 小結(jié)31-32
• 3.3 乳酸菌素R16的生物學(xué)特性研究32-39
• 3.3.1 pH對(duì)乳酸菌素R16的影響32-33
• 3.3.2 溫度對(duì)乳酸菌素R16的影響33
• 3.3.3 酶處理對(duì)乳酸菌素R16的影響33-34
• 3.3.4 乳酸菌素R16的抑菌譜34
• 3.3.5 乳酸菌素R16的最低抑菌濃度34-35
• 3.3.6 乳酸菌素R16對(duì)益生菌的影響35
• 3.3.7 乳酸菌素R16的抗氧化能力35-36
• 3.3.8 乳酸片球菌R16及乳酸菌素R16在豆粕中的應(yīng)用36-37
• 3.3.9 小結(jié)37-39
• 主要結(jié)論與展望39-40
• 致謝40-41
• 參考文獻(xiàn)41-44
• 附錄: 作者在攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文44

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本文編號(hào)：1082681