本文關(guān)鍵詞：動(dòng)物雙歧桿菌對(duì)小鼠腸道黏膜損傷的緩解作用及其機(jī)理研究

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【摘要】：腸道是機(jī)體消化吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的主要場(chǎng)所,同時(shí)還具有屏障作用。正常腸道屏障功能應(yīng)包括腸黏膜上皮屏障、腸道免疫系統(tǒng)、腸道菌群和腸道內(nèi)分泌,其中最重要的為腸黏膜上皮屏障。損傷的腸道黏膜層通透性增加,導(dǎo)致家畜免疫力降低,腸道菌群紊亂,極易引發(fā)腸道炎癥性疾病,降低其生產(chǎn)性能甚至死亡。雙歧桿菌作為典型的腸道益生菌,不僅能夠在家畜腸道內(nèi)定植調(diào)節(jié)腸道菌群,抑制有害菌的繁殖,還具有預(yù)防和治療腹瀉、提高機(jī)體免疫力等功能特性。本研究通過建立小鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型,觀察動(dòng)物雙歧桿菌A6對(duì)小鼠腸道黏膜組織損傷的預(yù)防和緩解作用,及其對(duì)小鼠腸黏膜免疫系統(tǒng)平衡、緊密連接蛋白表達(dá)量和腸道菌群的影響,從分子水平上闡明益生菌改善腸道黏膜損傷的機(jī)制。以BALB/c小鼠UC為實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?分為正常組、模型組、葡聚糖硫酸鈉+1×1010cfu/ml BAA6干預(yù)組、葡聚糖硫酸鈉+1×108cfu/ml BAA6干預(yù)組和葡聚糖硫酸鈉+1×106cfu/ml BAA6干預(yù)組。結(jié)果表明,UC模型組小鼠結(jié)腸腸道黏膜上皮損傷嚴(yán)重,預(yù)先口服BAA6菌株的UC小鼠呈現(xiàn)出不同程度好轉(zhuǎn),呈劑量依賴性,小鼠結(jié)腸長(zhǎng)度縮短程度明顯減少(P0.05),結(jié)腸炎疾病活動(dòng)指數(shù)、髓過氧化物酶活力均顯著低于模型組(P0.05),維持Th1/Th2細(xì)胞平衡和腸道菌群狀態(tài),C laudin-2、 STAT6、GATA4、Cdx2表達(dá)量較模型組顯著減少(P0.05)。口服適量BAA6對(duì)小鼠腸道黏膜損傷具有預(yù)防作用,其機(jī)制可能是通過維持Th1/Th2細(xì)胞平衡,減少Th1細(xì)胞因子IL-13的分泌量,抑制STAT6通路和GATA4、Cdx2的激活,降低Claudin-2表達(dá)量,從而達(dá)到降低腸道通透性、減輕小鼠結(jié)腸黏膜損傷的目的,同時(shí)還具有維持腸道菌群平衡的作用,有利于恢復(fù)腸道屏障功能。
【關(guān)鍵詞】：腸道黏膜 潰瘍性結(jié)腸炎 雙歧桿菌BAA6 緊密連接蛋白 腸道菌群
【學(xué)位授予單位】：河北工程大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S816;S856.4
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-11
• 第1章 緒論11-17
• 1.1 腸道屏障功能的研究進(jìn)展11-12
• 1.2 緊密連接蛋白研究現(xiàn)狀12-13
• 1.2.1 緊密連接蛋白介紹12
• 1.2.2 緊密連接改變與腸道疾病關(guān)系12-13
• 1.2.3 緊密連接蛋白與腸道免疫屏障作用關(guān)系13
• 1.3 腸道菌群研究進(jìn)展13-15
• 1.3.1 腸道菌群介紹13-14
• 1.3.2 腸道菌群功能及影響因素14
• 1.3.3 腸道菌群與腸道黏膜損傷關(guān)系14-15
• 1.4 益生菌研究進(jìn)展15-16
• 1.4.1 益生菌介紹15
• 1.4.2 益生菌對(duì)腸道黏膜的影響15-16
• 1.5 本研究的目的及意義16
• 1.6 技術(shù)路線16-17
• 第2章 動(dòng)物雙歧桿菌A6對(duì)結(jié)腸炎小鼠腸道屏障損壞預(yù)防作用的研究17-29
• 2.1 試驗(yàn)材料17-18
• 2.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物與菌株17
• 2.1.2 主要試劑17
• 2.1.3 主要試劑的配制17-18
• 2.1.4 主要儀器18
• 2.2 試驗(yàn)方法18-21
• 2.2.1 菌株的活化及收集18
• 2.2.2 急性潰瘍性結(jié)腸炎小鼠模型的建立與分組18-19
• 2.2.3 結(jié)腸炎小鼠生長(zhǎng)狀況的觀察測(cè)定19
• 2.2.4 結(jié)腸炎疾病活動(dòng)指數(shù)(disease activity index，DAI)19
• 2.2.5 小鼠結(jié)腸大體情況及長(zhǎng)度變化19
• 2.2.6 結(jié)腸病理切片及HE染色19-20
• 2.2.7 腸道組織病理學(xué)評(píng)分20-21
• 2.2.8 髓過氧化物酶(MPO)活性測(cè)定21
• 2.2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理21
• 2.3 試驗(yàn)結(jié)果21-26
• 2.3.1 小鼠體重變化情況21-22
• 2.3.2 小鼠結(jié)腸情況及長(zhǎng)度變化22-23
• 2.3.3 小鼠結(jié)腸炎疾病活動(dòng)指數(shù)(DAI)變化23
• 2.3.4 小鼠結(jié)腸組織學(xué)損傷評(píng)分變化情況23-25
• 2.3.5 各組小鼠髓過氧化物酶含量變化情況25-26
• 2.4 討論26-27
• 2.5 本章小結(jié)27-29
• 第3章 動(dòng)物雙歧桿菌A6對(duì)小鼠腸道屏障損壞預(yù)防作用機(jī)制的研究29-43
• 3.1 試驗(yàn)材料29-30
• 3.1.1 主要試劑29
• 3.1.2 主要儀器29-30
• 3.2 試驗(yàn)方法30-34
• 3.2.1 總RNA的抽提及逆轉(zhuǎn)錄30-31
• 3.2.2 檢測(cè)結(jié)腸組織中緊密連接蛋白Claudin-2 的表達(dá)水平31-32
• 3.2.3 酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定結(jié)腸組織細(xì)胞因子表達(dá)水平32-33
• 3.2.4 Real-time PCR法檢測(cè)結(jié)腸組織中STAT6的m RNA表達(dá)量33
• 3.2.5 Real-time PCR法檢測(cè)結(jié)腸組織中轉(zhuǎn)錄因子GATA4、CDX2的mRNA表達(dá)量33-34
• 3.2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理34
• 3.3 試驗(yàn)結(jié)果34-40
• 3.3.1 緊密連接蛋白Claudin-2 表達(dá)水平變化34-36
• 3.3.2 細(xì)胞因子ELISA數(shù)據(jù)結(jié)果36-39
• 3.3.3 小鼠結(jié)腸組織中STAT6的mRNA表達(dá)水平變化39-40
• 3.3.4 小鼠結(jié)腸組織中轉(zhuǎn)錄因子GATA4和CDX2的mRNA表達(dá)水平變化40
• 3.4 討論40-42
• 3.5 本章小結(jié)42-43
• 第4章 動(dòng)物雙歧桿菌A6對(duì)小鼠腸道菌群平衡恢復(fù)的研究43-57
• 4.1 試驗(yàn)材料43-44
• 4.1.1 主要試劑43
• 4.1.2 主要試劑溶液的配制43
• 4.1.3 主要儀器43-44
• 4.2 試驗(yàn)方法44-47
• 4.2.1 小鼠糞便基因組總DNA的提取44-45
• 4.2.2 腸道菌群PCR引物及特異性檢測(cè)45
• 4.2.3 獲取目的菌屬的標(biāo)準(zhǔn)DNA模板45-46
• 4.2.4 目的菌屬標(biāo)準(zhǔn)DNA模板濃度測(cè)定46
• 4.2.5 各目的菌屬RT-PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立46
• 4.2.6 RT-PCR法檢測(cè)小鼠糞便中腸道菌群的數(shù)量46-47
• 4.2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理47
• 4.3 試驗(yàn)結(jié)果47-54
• 4.3.1 小鼠糞便樣品中總DNA提取結(jié)果47-48
• 4.3.2 目的菌株標(biāo)準(zhǔn)DNA模板濃度測(cè)定結(jié)果48
• 4.3.3 引物特異性的驗(yàn)證結(jié)果48-50
• 4.3.4 目的菌屬定量PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立50-51
• 4.3.5 小鼠糞便樣品中腸道菌群含量的測(cè)定結(jié)果51-54
• 4.4 討論54-55
• 4.5 本章小結(jié)55-57
• 結(jié)論57-59
• 致謝59-61
• 參考文獻(xiàn)61-67
• 作者簡(jiǎn)介67
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文67
• 攻讀碩士學(xué)位期間參研的項(xiàng)目67-68

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本文編號(hào)：1069411