本文關(guān)鍵詞：牛傳染性鼻氣管炎病毒的分離鑒定及其部分gB蛋白的原核表達(dá)

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【摘要】：牛傳染性鼻氣管炎(IBR)是由牛皰疹病毒I型(BHV-1)引起的一種急性、熱性、接觸性傳染病。此病在全球范圍內(nèi)廣泛分布,主要損害牛的呼吸系統(tǒng)及生殖系統(tǒng),給養(yǎng)牛業(yè)帶來巨大損失,其所具有的潛伏感染性更使得本病防控難度大而難以根除。BHV-1編碼的糖蛋白gB具有高度的保守性,在病毒吸附、侵入及感染細(xì)胞過程中發(fā)揮重要作用,是病毒復(fù)制所必需的結(jié)構(gòu)蛋白。該蛋白能夠誘導(dǎo)宿主體液及細(xì)胞免疫應(yīng)答,是進(jìn)行IBRV檢測的首選特異性抗原之一�；诖�,本文進(jìn)行了以下三方面的研究：1牛傳染性鼻氣管炎的血清學(xué)和病原學(xué)檢測為探究IBR在寧夏地區(qū)存在繁殖障礙的奶牛群中的流行情況,本研究針對寧夏地區(qū)的18個奶牛群中出現(xiàn)繁殖障礙的奶牛進(jìn)行血清的采集,共計470份,利用酶聯(lián)免疫吸附試驗進(jìn)行IBR的血清學(xué)檢測；同時采集疑似IBR感染而死亡的組織病料,共計16份,利用PCR技術(shù)進(jìn)行IBRV的檢測。結(jié)果顯示：所采集血清中存在338份IBR抗體陽性血清,平均陽性率為71.9%：而疑似病料中存在7份IBRV陽性病料。此結(jié)果表明牛傳染性鼻氣管炎已在寧夏地區(qū)奶牛群中開始流行。2牛傳染性鼻氣管炎病毒的分離與鑒定將經(jīng)PCR檢測鑒定為IBRV陽性的組織臟器反復(fù)凍融處理幾次之后,取上清接種到MDBK細(xì)胞上進(jìn)行病毒的分離培養(yǎng)。結(jié)果從一份疑似IBR感染的犢牛肺臟中分離到了一株病毒,出現(xiàn)了明顯的細(xì)胞病變,通過病毒中和試驗、PCR方法及核酸測序鑒定后,證實在寧夏地區(qū)成功分離到了牛傳染性鼻氣管炎病毒,并將其命名為IBRVYF_15株。3 IBRV部分gB蛋白的原核表達(dá)對gB蛋白進(jìn)行抗原性分析,在其胞外區(qū)選出一有效片段,并設(shè)計合成其特異性引物,以提取的分離株IBRVYF_15的病毒基因組為模板擴(kuò)增出目的片段gBV。得到目的基因后將其插入表達(dá)載體pET32a中構(gòu)成重組質(zhì)粒,再轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL21中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),通過SDS-PAGE電泳鑒定及Western-blotting分析,得到了預(yù)期所需且高效表達(dá)的重組蛋白,并且重組蛋白能夠與IBR陽性血清發(fā)生特異性反應(yīng)。本研究成功克隆得到了的gB胞外區(qū)的基因片段,并通過大腸桿菌進(jìn)行高效表達(dá),得到能夠作為診斷IBRV的有效特異性抗原,為進(jìn)一步研究gB蛋白的功能特性以及建立有效的牛傳染性鼻氣管炎ELISA診斷方法奠定了基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：牛傳染性鼻氣管炎 血清學(xué)檢測 病毒分離 gB蛋白 原核表達(dá)
【學(xué)位授予單位】：寧夏大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S852.65
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-10
• 英文縮略詞表10-11
• 第一部分 文獻(xiàn)綜述11-21
• 1 牛傳染性鼻氣管炎的發(fā)展歷史及國內(nèi)外流行情況11-12
• 2 牛傳染性鼻氣管炎病毒的研究進(jìn)展12-14
• 2.1 IBRV的分類地位及血清型12-13
• 2.2 IBRV的病毒形態(tài)及培養(yǎng)13
• 2.3 IBRV的分子生物學(xué)特性13-14
• 2.4 IBRV所編碼的糖蛋白gB的研究概述14
• 3 牛傳染性鼻氣管炎的流行病學(xué)與癥狀14-16
• 3.1 牛傳染性鼻氣管炎的流行病學(xué)14-15
• 3.2 牛傳染性鼻氣管炎的癥狀15-16
• 4 牛傳染性鼻氣管炎的診斷與防制16-20
• 4.1 牛傳染性鼻氣管炎的診斷16-19
• 4.2 牛傳染性鼻氣管炎的防制19-20
• 5 研究目的與意義20-21
• 第二部分 試驗內(nèi)容21-50
• 第一章 牛傳染性鼻氣管炎的血清學(xué)和病原學(xué)檢測21-27
• 1.1 材料21-22
• 1.2 方法22-24
• 1.3 結(jié)果24-25
• 1.4 討論25-27
• 第二章 牛傳染性鼻氣管炎病毒的分離與鑒定27-34
• 2.1 材料27-28
• 2.2 方法28-30
• 2.3 結(jié)果30-32
• 2.4 討論32-34
• 第三章 IBRV部分gB蛋白的原核表達(dá)34-49
• 3.1 材料34-37
• 3.2 方法37-43
• 3.3 結(jié)果43-47
• 3.4 討論47-49
• 第四章 結(jié)論49-50
• 參考文獻(xiàn)50-55
• 附錄55-57
• 致謝57-58
• 個人簡介58

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本文編號：1047777