本文關(guān)鍵詞：雞大腸桿菌菌影的制備及免疫效果研究

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【摘要】：雞大腸桿菌病是指雞群中由大腸桿菌(Escherichia coli,E.coli)所引起的局部或全身性感染的一種傳染性疾病,本病在世界各地均有發(fā)生,其復(fù)雜的抗原性,眾多的血清型,加之我國(guó)禽類養(yǎng)殖數(shù)量大、養(yǎng)殖水平相對(duì)較低,導(dǎo)致該病在畜禽之間的傳播,難以防控。目前普遍使用的大腸桿菌滅活疫苗不能有效地控制該疾病的流行,所以研制新型、高效的雞大腸桿菌疫苗勢(shì)在必行。本研究利用pBV220載體的調(diào)控元件、啟動(dòng)子和終止子,將PhiX174噬菌體裂解基因E與金黃色葡萄球菌核酸酶A基因(SNA)通過(guò)Linker連接實(shí)現(xiàn)融合表達(dá),SN基因作為輔助基因可以將細(xì)菌的核酸降解為100 bp以下的小片段,使之更易排出胞外提高裂解率。本試驗(yàn)成功構(gòu)建了高效的重組質(zhì)粒pFBDM-E-SN,采取電擊穿孔法將其轉(zhuǎn)化至雞大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞中,在28℃條件下培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,然后快速升溫至42℃誘導(dǎo)裂解基因的表達(dá),利用平板法計(jì)算細(xì)菌的裂解率,其裂解率可高達(dá)99.9%。對(duì)O78大腸桿菌菌影疫苗進(jìn)行評(píng)價(jià)研究,將50只7日齡的雞只隨機(jī)分成三組:菌影疫苗組、滅活疫苗組、對(duì)照組;菌影疫苗組和滅活疫苗組每組20只,對(duì)照組為10只,7日齡首免,間隔14d后加強(qiáng)免疫一次,加強(qiáng)免疫7天后進(jìn)行攻毒,統(tǒng)計(jì)雞只死亡情況,以計(jì)算保護(hù)率為指標(biāo)評(píng)價(jià)菌影疫苗的保護(hù)效果。同時(shí)對(duì)一免7d、14d、二免7d后、攻毒后7d進(jìn)行翅下靜脈采血,分離血清,以O(shè)78大腸桿菌作為包被抗原,間接ELISA進(jìn)行血清抗體的檢測(cè),評(píng)價(jià)體液免疫效果。二免疫7d后,用雞大腸桿菌進(jìn)行攻毒,觀察并記錄雞死亡數(shù)量。通過(guò)雞只存活率、內(nèi)臟病理變化,體液免疫水平綜合評(píng)價(jià)雞大腸桿菌菌影疫苗的免疫保護(hù)效果。動(dòng)物攻毒保護(hù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,菌影疫苗可以刺激機(jī)體產(chǎn)生比滅活疫苗更高的抗體水平,在50倍LD50的攻毒劑量下,菌影疫苗的保護(hù)效率為90%,而滅活疫苗的保護(hù)率為70%,這表明菌影疫苗比傳統(tǒng)滅活疫苗具有更高的保護(hù)效果,并有潛力成為新的大腸桿菌疫苗類型。
【關(guān)鍵詞】：雞大腸桿菌 菌影 免疫效果
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S858.31
【目錄】：

• 摘要5-6
• ABSTRACT6-9
• 文獻(xiàn)綜述9-15
• 第一章 雞大腸桿菌病研究進(jìn)展9-15
• 1.1 雞大腸桿菌病概述9-10
• 1.2 雞大腸桿菌疫苗的研究10
• 1.3 菌影疫苗研究進(jìn)展10-15
• 1.3.1 菌影疫苗的裂解機(jī)制11-12
• 1.3.2 菌影疫苗的優(yōu)勢(shì)12-13
• 1.3.3 菌影疫苗的應(yīng)用13
• 1.3.4 雙裂解基因在菌影疫苗中的應(yīng)用13-14
• 1.3.5 菌影的不足與解決措施14-15
• 試驗(yàn)研究15-31
• 第二章 大腸桿菌重組菌株的構(gòu)建及溶菌動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)15-27
• 2.1 材料15-16
• 2.1.1 菌株與載體15
• 2.1.2 試劑與儀器15
• 2.1.3 培養(yǎng)基及電泳相關(guān)溶液15-16
• 2.2 方法16-22
• 2.2.1 合成E/SN基因16
• 2.2.2 重組質(zhì)粒PBV220-E-SN的構(gòu)建16-18
• 2.2.3 重組質(zhì)粒pFBDM-E-SN的構(gòu)建18-21
• 2.2.4 O78大腸桿菌電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的制備21
• 2.2.5 電轉(zhuǎn)化O78大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞21
• 2.2.6 電轉(zhuǎn)化重組質(zhì)粒的鑒定21
• 2.2.7 重組大腸桿菌的溶菌動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)21-22
• 2.2.8 金黃色葡萄球菌核酸酶活性檢測(cè)22
• 2.3 結(jié)果22-26
• 2.3.1 成功構(gòu)建重組質(zhì)粒pBV220-E-SN22-23
• 2.3.2 成功構(gòu)建重組質(zhì)粒pFBDM-E-SN23-25
• 2.3.3 誘導(dǎo)后細(xì)菌生長(zhǎng)曲線25
• 2.3.4 重組雞大腸桿菌菌影的裂解率25
• 2.3.5 金黃色葡萄球菌核酸酶活性檢測(cè)25-26
• 2.4 討論26
• 2.5 小結(jié)26-27
• 第三章 078大腸桿菌菌影的制備及免疫效果評(píng)價(jià)27-31
• 3.1 材料27
• 3.1.1 菌株27
• 3.1.2 主要試劑及儀器27
• 3.2 方法27-28
• 3.2.1 大腸桿菌O78菌影的制備及殘余活菌滅活27
• 3.2.2 安全性檢驗(yàn)27
• 3.2.3 雞只半數(shù)致死量試驗(yàn)27
• 3.2.4 雞只免疫與攻毒27-28
• 3.2.5 血清特異性抗體檢測(cè)28
• 3.3 結(jié)果28-30
• 3.3.1 無(wú)菌檢測(cè)28
• 3.3.2 安全性檢驗(yàn)28-29
• 3.3.3 O78雞大腸桿菌LD50的測(cè)定結(jié)果29
• 3.3.4 血清中抗體水平檢測(cè)結(jié)果29
• 3.3.5 攻毒后保護(hù)情況29-30
• 3.4 討論30
• 3.5 小結(jié)30-31
• 結(jié)論31-32
• 參考文獻(xiàn)32-34
• 致謝34-35
• 作者簡(jiǎn)介35

【相似文獻(xiàn)】

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