本文關鍵詞：禽和豬組織中哌嗪殘留氣相色譜—串聯(lián)質譜確證分析方法的研究

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【摘要】：哌嗪作為一種有效的驅蟲藥,在獸醫(yī)臨床上應用廣泛。然而,不規(guī)范的使用造成動物源性食品中哌嗪殘留嚴重,長期食用含有哌嗪的動物食品及其制品,會對人類健康造成威脅。目前,國內外動物組織中哌嗪殘留檢測相關研究較少。本研究以京海黃雞、櫻桃谷鴨、揚州鵝以及杜×長×大三元雜交豬為實驗素材,綜合利用柱前衍生、加速溶劑萃取和固相萃取等技術,建立禽和豬肌肉、肝臟、腎臟以及(皮膚+脂肪)組織中哌嗪殘留氣相色譜-串聯(lián)質譜檢測方法(GC-MS/MS),為動物源性食品中哌嗪殘留檢測標準的制定提供科學依據,為殘留監(jiān)控提供技術手段。本實驗主要研究結果如下：1.建立和優(yōu)化了乙酸酐法衍生哌嗪的實驗條件,即20μg哌嗪標準品(完全溶于二氯甲烷溶劑)添加50μL乙酸酐和100μL三乙胺(添加量均過飽和),50℃密閉容器中反應30 min,衍生產物為哌嗪N,N-雙取代產物1,4-二乙�；哙�,并成功應用于氣相色譜-串聯(lián)質譜(GC-MS/MS)分析,改善了哌嗪的色譜特征,峰形尖銳,定量準確。2.建立和優(yōu)化了采用加速溶劑萃取儀(ASE350)提取禽和豬組織中哌嗪殘留的方法。乙腈作為提取溶劑,樣品依次與無水硫酸鈉、硅藻土研磨混勻裝填入萃取池,80℃、1500psi條件下,在線去脂(正己烷做脫脂劑)與哌嗪萃取(乙腈作為萃取劑)連續(xù)進行。哌嗪在禽和豬組織中的添加水平分別為定量限(LOQ)水平、50.0、100.0、500.0、1000.0和2000.0 μg/kg濃度時,各組織樣品平均回收率均在80.98%-96.26%之間,相對標準偏差均在1.58%-4.53%之間。該提取方法溶劑用量少,樣品基質影響小,萃取效率高,回收率高,且安全、快速、全自動。3.首次建立和優(yōu)化了禽和豬肌肉、肝臟、腎臟以及(皮膚+脂肪)組織中哌嗪殘留的氣相色譜-串聯(lián)質譜(GC-MS/MS)確證檢測方法。采用EI模式,SCAN和SIM掃描定性,Auto SRM結合外標法定量；在各組織中添加哌嗪4.5～2500.0μg/kg濃度范圍內,定量離子對m/z170.168.1的色譜峰面積與其濃度線性關系良好,決定系數R2=0.9995；各組織精密度測定結果：日內相對標準偏差均在1.15%-5.92%之間,日間相對標準偏差均在2.03%-8.10%之間。在優(yōu)化的實驗條件下,哌嗪在禽和豬組織中的檢測限(LOD)在1.4～1.6Hg/kg (S/N≥3),定量限(LOQ)在4.8～5.2μg/kg (S/N≥10)。方法驗證參數均滿足中國農業(yè)部、歐盟和美國FDA獸藥殘留檢測的要求,定量準確、快速、靈敏度高。
【關鍵詞】：動物可食性組織 哌嗪 氣相色譜-串聯(lián)質譜法 殘留 確證分析
【學位授予單位】：揚州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S859.84
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• ABSTRACT5-10
• 符號說明10-11
• 第一章 文獻綜述11-21
• 1 哌嗪的物理化學性質11-12
• 2 哌嗪的合成工藝及用途12-13
• 2.1 哌嗪的合成工藝12
• 2.2 哌嗪及其衍生物的應用12-13
• 2.2.1 哌嗪及其衍生物在醫(yī)藥領域的應用12-13
• 2.2.2 哌嗪及其衍生物在其他領域的應用13
• 3. 哌嗪及其衍生物的藥理學、毒理學研究13-14
• 3.1 作用機理13
• 3.2 毒理學研究及不良反應13-14
• 4 哌嗪檢測方法的研究14-15
• 4.1 重量分析法14
• 4.2 比色法14
• 4.3 離子色譜法14
• 4.4 分光光度法14
• 4.5 氣相色譜法14-15
• 4.6 液相色譜法15
• 5 GC-MS與GC-MS/MS概述15-17
• 5.1 GC-MS技術簡介15-16
• 5.2 GC-MS的基本結構和工作原理16
• 5.3 GC-MS/MS技術16
• 5.4 GC-MS/MS定量方法的建立16-17
• 6 樣品的前處理方法17-20
• 6.1 加速溶劑萃取技術17-18
• 6.1.1 加速溶劑萃取技術的原理17
• 6.1.2 加速溶劑萃取的一般流程17-18
• 6.1.3 加速溶劑萃取的優(yōu)勢18
• 6.2 離心濃縮技術18-19
• 6.2.1 離心濃縮技術的原理18
• 6.2.2 離心濃縮儀系統(tǒng)的組成18
• 6.2.3 離心濃縮儀的應用18-19
• 6.3 衍生化原理及檢測方法19-20
• 6.3.1 目標物衍生化的意義19
• 6.3.2 衍生化反應方式19-20
• 7 研究目的和意義20-21
• 7.1 研究目的20
• 7.2 研究意義20-21
• 第二章 禽和豬組織中哌嗪殘留氣相色譜-串聯(lián)質譜(GC-MS/MS)確證分析方法的研究21-68
• 1 材料與方法21-27
• 1.1 標準品、主要試劑與材料21-22
• 1.2 主要溶液配制22
• 1.2.1 標準品溶液22
• 1.2.2 氨水甲醇溶液22
• 1.2.3 鹽酸水溶液22
• 1.2.4 鹽酸甲醇溶液22
• 1.3 主要儀器22-23
• 1.4 試驗方法23-27
• 1.4.1 氣相色譜條件23
• 1.4.2 質譜條件23
• 1.4.3 供試動物的飼養(yǎng)與樣品采集23
• 1.4.4 樣品的提取與凈化23-25
• 1.4.5 樣品的衍生化25
• 1.4.6 標準曲線的繪制25
• 1.4.7 樣品回收率的測定25
• 1.4.8 樣品精密度的測定25-26
• 1.4.9 檢測限與定量限的測定26
• 1.4.10 確定限與檢測容量26
• 1.4.11 基質效應26-27
• 2 結果與分析27-58
• 2.1 母離子與子離子的確定27-30
• 2.2 標準曲線和線性范圍30
• 2.3 添加回收率和精密度30-55
• 2.3.1 雞組織中哌嗪的添加回收率和精密度30-36
• 2.3.2 鴨組織中哌嗪的添加回收率和精密度36-42
• 2.3.3 鵝組織中哌嗪的添加回收率和精密度42-48
• 2.3.4 豬組織中哌嗪的添加回收率和精密度48-55
• 2.4 檢測限與定量限55
• 2.5 確定限與檢測容量55-57
• 2.6 基質效應的評估57-58
• 3 討論58-68
• 3.1 檢測方法的選擇與評價58
• 3.2 毛細管色譜柱的選擇58-59
• 3.3 溶劑的選擇59-60
• 3.4 樣品的提取與凈化60-63
• 3.4.1 萃取溶劑的選擇60
• 3.4.2 萃取溫度的優(yōu)化60
• 3.4.3 沖洗溶劑體積的優(yōu)化60-61
• 3.4.4 不同提取方法和提取溶劑的比較61-63
• 3.5 樣品的衍生化反應與產物穩(wěn)定性63-67
• 3.5.1 衍生化試劑的選擇63
• 3.5.2 待優(yōu)化條件的確定63-64
• 3.5.3 衍生反應溫度的優(yōu)化64
• 3.5.4 衍生反應時間的優(yōu)化64-65
• 3.5.5 反應試劑用量的優(yōu)化65-66
• 3.5.6 衍生產物的穩(wěn)定性66-67
• 3.6 GC-MS/MS參數的優(yōu)化67-68
• 3.6.1 氣相參數的優(yōu)化67
• 3.6.2 質譜參數的優(yōu)化67
• 3.6.3 色譜分析的重復性67-68
• 全文結論68-69
• 參考文獻69-76
• 致謝76-77
• 攻讀碩士學位期間發(fā)表論文77-78

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本文編號：1044363