本文關(guān)鍵詞：青藏地區(qū)斑頭雁（Anser indicus）攜帶病原的監(jiān)測研究

  更多相關(guān)文章： 禽流感病毒 H5N1 糞便細(xì)菌 分子特征 遺傳進(jìn)化分析 耐藥性

【摘要】：青藏地區(qū)是重要的候鳥繁殖地和越冬地,每年約上萬只候鳥在此停留。2005年5月,青海湖野鳥中暴發(fā)高致病性禽流感,導(dǎo)致上千只野鳥死亡,其中超過一半為斑頭雁(Anser indicus),隨后該病毒擴(kuò)散至歐洲和非洲地區(qū),且在接下來的幾年中,該毒株在中亞遷徙路線的候鳥中被多次分離到,這使野鳥在禽流感傳播中所起到的作用受到關(guān)注。除禽流感病毒外,斑頭雁也可能攜帶病原細(xì)菌,對野生動(dòng)物、家畜家禽以及人類的健康造成威脅。每年4~9月,有超過6000只斑頭雁陸續(xù)遷徙至青海湖進(jìn)行繁殖及育雛,頻繁的個(gè)體間的接觸可能會(huì)促進(jìn)了病毒、細(xì)菌等病原在野鳥之間的水平傳播。本研究于2013~2015年,采集青藏地區(qū)斑頭雁組織器官及新鮮糞便累計(jì)1792份,首先采用RT-PCR試驗(yàn)進(jìn)行禽流感病毒核酸的檢測,然后對核酸檢測為陽性的樣品,采用SPF雞胚進(jìn)行病毒分離,最后對分離得到的禽流感病毒進(jìn)行分子特征及遺傳進(jìn)化分析。同時(shí),對2015年青海湖采集到的斑頭雁糞便進(jìn)行細(xì)菌的分離鑒定以及耐藥性分析,探討斑頭雁糞便中攜帶細(xì)菌性病原的情況。主要研究結(jié)果如下:1.2013~2015斑頭雁攜帶禽流感病毒檢測與病毒的分離2013年、2014年、2015年分別在環(huán)青海湖濕地河口采集斑頭雁糞便及組織樣品124份、348份、860份,其中2015年在青海湖月牙灣采集死亡斑頭雁幼鳥一只;2015年在西藏雅魯藏布江流域采集斑頭雁糞便460份。對樣品進(jìn)行禽流感病毒核酸檢測,顯示2013~2015年,青海湖斑頭雁中禽流感病毒核酸的陽性檢出率分別為0.72%(9/124)、5.7%(20/348)、18%(157/860);2015年,西藏雅魯藏布江流域采集到的斑頭雁糞便中,禽流感病毒核酸的陽性檢出率是22%(101/460)。從2015年采集的死亡斑頭雁幼鳥的肺部組織和3個(gè)斑頭雁糞便樣品中共分離到4株禽流感病毒H5N1,分別命名為A/bar-headed goose/Qinghai/F/2015(H5N1)、A/bar-headed goose/47/2015(H5N1)、A/bar-headed goose/Qinghai/70/2015(H5N1)、A/bar-headed goose/Qinghai/133/2015-(H5N1),簡稱QHL-F、QHL-47、QHL-70、QHL-133。2.禽流感病毒分子特征及遺傳進(jìn)化分析對2015年分離到的4株禽流感病毒進(jìn)行全基因測序,并進(jìn)行分子特征及遺傳進(jìn)化分析,結(jié)果表明,青海湖分離株QHL-F、QHL-47、QHL-70、QHL-133屬于2.3.2.1c譜系,與2015年1月三門峽大天鵝疫情中分離到的毒株A/whooper swan/Henan/SMX1/2015(H5N1)各個(gè)基因片段均高度同源,且序列的一致性在99%~100%之間。對青海湖分離株進(jìn)行遺傳特征分析,發(fā)現(xiàn)其HA蛋白堿性裂解位點(diǎn)均含有多個(gè)連續(xù)的堿性氨基酸,符合高致病性禽流感病毒的典型分子特征。HA蛋白138A、160A位點(diǎn)發(fā)生變異,突變用這種形式表示:S138A,表示有S突變?yōu)锳,這可能會(huì)增強(qiáng)病毒結(jié)合哺乳動(dòng)物受體的能力。NA莖部有20個(gè)氨基酸的缺失,這可能會(huì)增加病毒在哺乳動(dòng)物中的致病力。此外,未發(fā)現(xiàn)其他與病毒致病性及耐藥性相關(guān)的氨基酸位點(diǎn)發(fā)生變異。3.斑頭雁糞便中細(xì)菌的分離鑒定從2015年采集的斑頭雁糞便中挑選出30份進(jìn)行細(xì)菌的分離鑒定。從30份斑頭雁糞便中共分離到細(xì)菌123株,根據(jù)細(xì)菌在營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中的形態(tài)特征以及革蘭氏染色情況,將分離到的細(xì)菌分為10類,分別從每一類細(xì)菌中挑取一株細(xì)菌進(jìn)行生理生化及分子生物學(xué)鑒定。結(jié)果顯示這10株細(xì)菌分別為大腸埃希菌(Escherichia coli)、水生拉恩氏菌(Rahnella aquatilis)、蒙氏腸球菌(Enterococcus mundtii)、枯草芽孢桿菌(Arthrobacter citreus)、檸檬節(jié)桿菌(Bacillus sublitis)、腐敗希瓦氏菌(Shewanella pulrefaciens)、河生腸桿菌(Enterobacter amnigenus)、成團(tuán)泛菌(Pantoea agglomerans)、殺鮭氣單胞菌(Aeromonas salmonicida)和產(chǎn)酸克雷伯菌(Klebsiella oxytoca)。選取氨芐西林、哌拉西林、阿莫西林/克拉維酸、頭孢唑林、頭孢他啶、氨曲南、慶大霉素、卡那霉素、阿米卡星、四環(huán)素、氯霉素、環(huán)丙沙星、諾氟沙星藥敏紙片,對分離菌株進(jìn)行耐藥性分析,發(fā)現(xiàn)水生拉恩菌、殺鮭氣單胞菌和成團(tuán)泛菌表現(xiàn)為多重耐藥性;其他細(xì)菌對氨芐西林和四環(huán)素有一定的耐藥性,對其余受試藥物都有不同程度的敏感性。
【關(guān)鍵詞】：禽流感病毒 H5N1 糞便細(xì)菌 分子特征 遺傳進(jìn)化分析 耐藥性
【學(xué)位授予單位】：中國林業(yè)科學(xué)研究院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S858.9
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-15
• 第一章 前言15-30
• 1.1 禽流感概述15-23
• 1.1.1 禽流感定義15
• 1.1.2 禽流感病毒的分類和命名15-16
• 1.1.3 禽流感病毒粒子特點(diǎn)16
• 1.1.4 禽流感病毒基因及其編碼蛋白16-17
• 1.1.5 禽流感病毒的分子致病機(jī)制17-18
• 1.1.6 禽流感病毒的耐藥機(jī)制18
• 1.1.7 禽流感的流行與危害18-20
• 1.1.8 禽流感的宿主范圍、致病性及決定因素20-22
• 1.1.9 野生鳥類感染禽流感情況22-23
• 1.2 野鳥中攜帶的細(xì)菌23-27
• 1.2.1 革蘭氏陽性球菌23-24
• 1.2.2 革蘭氏陽性桿菌24
• 1.2.3 腸桿菌科24-25
• 1.2.4 分枝桿菌科25
• 1.2.5 彎曲桿菌科25
• 1.2.6 螺旋體科25
• 1.2.7 巴斯德氏菌科25-26
• 1.2.8 弧菌科26
• 1.2.9 支原體26
• 1.2.10 衣原體26-27
• 1.2.11 立克次氏體及無形小體科27
• 1.3 斑頭雁的重要分布與遷徙27-29
• 1.3.1 斑頭雁遷徙路線的研究方法27-28
• 1.3.2 斑頭雁的遷徙路線及其影響因素28
• 1.3.3 斑頭雁在我國的重要分布地點(diǎn)和時(shí)間28-29
• 1.4 研究目的及意義29-30
• 第二章 2013-2015 年斑頭雁攜帶禽流感病毒檢測與病毒的分離30-42
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料與實(shí)驗(yàn)方法30-37
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料30-32
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)方法32-37
• 2.2 結(jié)果和討論37-41
• 2.2.1 結(jié)果37-39
• 2.2.2 討論39-41
• 2.3 小結(jié)41-42
• 第三章 禽流感病毒分子特征及遺傳進(jìn)化分析42-66
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料與實(shí)驗(yàn)方法42-48
• 3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料42-43
• 3.1.2 實(shí)驗(yàn)方法43-48
• 3.2 結(jié)果與討論48-65
• 3.2.1 結(jié)果48-62
• 3.2.2 討論62-65
• 3.3 小結(jié)65-66
• 第四章 斑頭雁糞便中細(xì)菌種類及耐藥性分析66-77
• 4.1 實(shí)驗(yàn)材料與實(shí)驗(yàn)方法66-70
• 4.1.1 實(shí)驗(yàn)材料66-67
• 4.1.2 實(shí)驗(yàn)方法67-70
• 4.2 結(jié)果與討論70-75
• 4.2.1 結(jié)果70-74
• 4.2.2 討論74-75
• 4.3 小結(jié)75-77
• 參考文獻(xiàn)77-92
• 在讀期間學(xué)術(shù)研究92-93
• 致謝93-94

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 ;美研制出抗禽流感新藥[J];中國禽業(yè)導(dǎo)刊;2000年20期

2 徐兆煒;禽流感1999年近況[J];預(yù)防醫(yī)學(xué)情報(bào)雜志;2000年02期

3 謝健屏;禽流感病毒[J];中國臨床醫(yī)生;2000年04期

4 ;禽流感的病毒特性[J];中國家禽;2001年05期

5 ;禽流感高免球蛋白效果好[J];中國家禽;2001年08期

6 ;農(nóng)業(yè)部、國家質(zhì)檢總局、外經(jīng)貿(mào)部發(fā)出緊急通知 要求嚴(yán)堵禽流感[J];內(nèi)蒙古畜牧科學(xué);2001年03期

7 ;農(nóng)業(yè)部等緊急通知各地嚴(yán)防禽流感[J];四川畜牧獸醫(yī);2001年06期

8 羅開健,沈祥廣,蘇鴻程,勞秋紅;禽泰克對禽流感的防治效果試驗(yàn)[J];養(yǎng)禽與禽病防治;2001年02期

9 盧建紅;禽流感的危害[J];湖南農(nóng)業(yè);2001年03期

10 魏鳳祥,周琦,張萍,葉喜永;加強(qiáng)禽流感診斷 提高預(yù)防能力[J];中國動(dòng)物保健;2001年06期

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 孫曉林;;禽流感和公共衛(wèi)生[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)獸醫(yī)病理學(xué)分第12次暨中國動(dòng)物病理生理學(xué)專業(yè)委員會(huì)第11次學(xué)術(shù)討論會(huì)論文集[C];2003年

2 何義林;葉冬青;;禽流感病毒對人類感染機(jī)制的研究進(jìn)展[A];第二屆全國人畜共患病學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2008年

3 春陽;李東;;再論“以科學(xué)發(fā)展觀應(yīng)對禽流感事件”——評禽流感病毒變種兩次恐慌論[A];首屆中國黃羽肉雞行業(yè)發(fā)展大會(huì)會(huì)刊[C];2008年

4 鄧潔麗;段明星;俞初一;江龍;;聚聯(lián)乙炔有序組裝體在識別禽流感病毒方面的應(yīng)用研究[A];中國化學(xué)會(huì)第十二屆膠體與界面化學(xué)會(huì)議論文摘要集[C];2009年

5 孫恩澤;謝敏;趙海粟;黃碧海;劉書琳;張萬坡;張志凌;王漢中;龐代文;;量子點(diǎn)標(biāo)記禽流感病毒[A];第六屆全國化學(xué)生物學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2009年

6 黃志堅(jiān);陳強(qiáng);李清祿;王壽昆;江和基;;不同消毒劑對禽流感病毒的殺滅試驗(yàn)[A];福建省科協(xié)第八屆學(xué)術(shù)年會(huì)分會(huì)場“轉(zhuǎn)變飼養(yǎng)方式，，促進(jìn)海西畜牧業(yè)和諧發(fā)展”學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2008年

7 周祖華;張敏;程禮明;徐彬;沈彩信;;禽流感流行趨勢分析[A];全國人畜共患病學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2006年

8 王志宇;張議文;劉桂林;;禽流感病毒的分子生物學(xué)研究進(jìn)展[A];全國動(dòng)物生理生化第十一次學(xué)術(shù)交流會(huì)論文摘要匯編[C];2010年

9 劉迎芳;饒子和;;禽流感病毒(H5N1)RNA聚合酶PA亞基相關(guān)三維晶體結(jié)構(gòu)與功能分析[A];第十一次中國生物物理學(xué)術(shù)大會(huì)暨第九屆全國會(huì)員代表大會(huì)摘要集[C];2009年

10 韋婷;胡杰;蘭彬;陸文俊;蘇凱;覃芳蕓;;廣西暴發(fā)中低毒力禽流感情況報(bào)告[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)禽病學(xué)會(huì)分會(huì)第十次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2000年

中國重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 農(nóng)業(yè)部動(dòng)物疫病診斷與流行病學(xué)中心主任 崔尚金 博士;候鳥發(fā)生禽流感給我們的警示[N];中國畜牧獸醫(yī)報(bào);2005年

2 莫書瑩;世衛(wèi)警告：禽流感或大流行全球經(jīng)濟(jì)應(yīng)警惕[N];第一財(cái)經(jīng)日報(bào);2005年

3 本報(bào)記者 魏紅欣;禽流感“啄”痛全球經(jīng)濟(jì)[N];國際金融報(bào);2005年

4 本報(bào)記者　許凱;狙擊禽流感：一場鳥與人的戰(zhàn)爭[N];國際金融報(bào);2005年

5 新華社記者　楊愛國;防控禽流感需要加強(qiáng)國際合作[N];光明日報(bào);2005年

6 李楊;禽流感疫情不會(huì)長期影響農(nóng)產(chǎn)品期價(jià)[N];金融時(shí)報(bào);2005年

7 羅政、夏文輝;香港強(qiáng)化防止禽流感措施[N];人民日報(bào)海外版;2004年

8 本報(bào)記者　張向永　趙秀芹;禽流感讓全世界手牽手[N];市場報(bào);2005年

9 ;禽流感病毒能否絕跡？[N];中國石油報(bào);2004年

10 何源;嚴(yán)防禽流感從境外傳入我國[N];中國食品質(zhì)量報(bào);2005年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 鄒鎮(zhèn);H5N1型禽流感病毒和甲型H1N1流感病毒致急性呼吸損傷的機(jī)理研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2012年

2 趙蔚;基于磁分離和熒光量子點(diǎn)標(biāo)記的高靈敏禽流感病毒檢測[D];武漢大學(xué);2012年

3 區(qū)嘉賢;H7N9禽流感患者的臨床特征及預(yù)后分析[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

4 劉三紅;禽流感的數(shù)學(xué)建模及數(shù)值模擬[D];華中師范大學(xué);2015年

5 樊兆斌;野鳥源禽流感病毒(AIV)分離株的遺傳進(jìn)化及其致病性研究[D];東北林業(yè)大學(xué);2014年

6 桑曉宇;H9N2亞型禽流感病毒在豚鼠模型中水平傳播的分子機(jī)制研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

7 楊文濤;靶向樹突狀細(xì)胞通用型禽流感病毒重組乳酸菌的研究[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

8 石霖;北方某省主要亞型禽流感現(xiàn)地調(diào)查分析及RT-LAMP檢測方法研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

9 張曉劍;HA蛋白糖基化修飾對H5N1亞型禽流感病毒復(fù)制、致病性和抗原性的影響[D];揚(yáng)州大學(xué);2014年

10 朱聞斐;H7N9禽流感病毒致病與傳播機(jī)制研究[D];中國疾病預(yù)防控制中心;2015年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 高曉龍;2014年度中國東部候鳥禽流感病毒分離與鑒定[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

2 徐曉龍;H5和H7亞型禽流感病毒熒光定量RT-PCR檢測方法的建立[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

3 韓苗苗;一類人畜共患的禽流感傳染病傳播模型[D];大連理工大學(xué);2015年

4 王秋珍;H9N2禽流感病毒NS1蛋白誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激促進(jìn)DF-1細(xì)胞凋亡[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2015年

5 梁威;5株H9N2亞型AIV血凝素結(jié)構(gòu)分析及感染A549細(xì)胞的蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

6 劉媛媛;MDCK細(xì)胞表達(dá)雞ST3GAL I基因?qū)9亞型禽流感病毒增殖情況的影響[D];河南農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

7 孟芳;H9N2亞型禽流感HA基因演化及其內(nèi)部基因在H5N2亞型流感病毒演化中的作用[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

8 韓雯;山東地區(qū)H9N2禽流感流行病學(xué)調(diào)查及流行毒株分子生物學(xué)檢測[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

9 查國飛;昆蟲細(xì)胞表達(dá)重組H5亞型禽流感HA蛋白及其免疫原性研究[D];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

10 侯群;新疆青格達(dá)湖濕地鳥類中H5、H7亞型AIV和NDV流行病學(xué)監(jiān)測[D];石河子大學(xué);2015年

本文編號：1038351