本文關(guān)鍵詞：蛹蟲草類胡蘿卜素對小鼠生長、免疫和抗氧化性能的影響

  更多相關(guān)文章： 蛹蟲草類胡蘿卜素 提取 小鼠 生長 免疫 抗氧化

【摘要】：本文優(yōu)化了蛹蟲草類胡蘿卜素的提取方法,利用動物試驗(yàn)和細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)研究了蛹蟲草類胡蘿卜素提取物(CMCE)對小鼠生長、免疫、抗氧化性能的影響以及對癌細(xì)胞增殖的抑制作用,研究包含三個部分,共四個試驗(yàn),試驗(yàn)過程和結(jié)果分別摘要如下：第一部分試驗(yàn)以蛹蟲草類胡蘿卜素的提取得率為考察指標(biāo),分別運(yùn)用酸熱提取法、超聲提取法、酸熱超聲提取法、微波提取法、酸熱微波提取法、丙酮提取法提取類胡蘿卜素,比較這6種方法的提取得率,得出酸熱超聲提取法是較好的提取方法。采用酸熱超聲提取法,設(shè)鹽酸濃度、酸浸時(shí)間、沸水浴時(shí)間、超聲功率、超聲溫度和超聲時(shí)間等6個單因素試驗(yàn),結(jié)合L27(3B)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì),優(yōu)化提取工藝參數(shù)。結(jié)果表明：1)得出酸熱超聲提取法的較優(yōu)提取條件為鹽酸濃度2.25 mol/L,酸浸時(shí)間30 min,沸水浴時(shí)間6 min,超聲功率400 W,超聲溫度25℃,超聲時(shí)間25 min; 2)蛹蟲草類胡蘿卜素提取得率為1105.53 lμg/g,比優(yōu)化前提高12.12%； 3)影響提取得率大小的因素依次為超聲功率、酸浸時(shí)間、鹽酸濃度、沸水浴時(shí)間、超聲溫度、超聲時(shí)間。第二部分采用體內(nèi)試驗(yàn)方法分別探討了以不同濃度CMCE以及不同種類的類胡蘿卜素灌喂小鼠后對其生長、免疫和抗氧化性能的影響,包括兩個試驗(yàn),如下：試驗(yàn)一探究了不同濃度的CMCE對小鼠生長、免疫以及抗氧化性能的影響。將120只ICR小鼠隨機(jī)分為4組,分別灌喂Omg/mL(對照組)、2mg/mL(低濃度組)、4mg/mL(中濃度組)和8mg/mL(高濃度)的CMCE溶液0.2mL/只／天。結(jié)果表明：1)與對照組相比,在正試期14d時(shí),低濃度和中濃度組ADG極顯著提高(P0.01),低濃度組F/G顯著降低(P0.∞)；而從整個試驗(yàn)期來看,中、低濃度組的ADFI顯著高于對照組(P0.05), ADG極顯著高于對照組(P0.01),F/G極顯著低于對照組(P0.01)：灌喂低濃度和中濃度CMCE能提高小鼠DM消化率(P0.∞)以及血清CHO (P0.05)和TG含量(P0.∞),能提高小鼠十二指腸的絨毛高度/隱窩深度(V/C)比值；2)低濃度組和中濃度組小鼠脾臟TNF-amRNA的相對表達(dá)量極顯著高于對照組(P0.01)；而灌喂高濃度的CMCE能提高小鼠血清IgG的含量(P0.001)以及小鼠脾臟IL-2 mRNA的相對表達(dá)量(P0.01),能降低小腸三個區(qū)段的VC比值；3)低濃度組小鼠血清CAT和GSH-Px活性極顯著高于對照組和另外兩個處理組(P0.01)；中濃度組小鼠血清MDA的含量顯著高于高濃度組(P0.05)；低濃度組小鼠肝臟SOD活性顯著高于對照組(P0.05)；肝臟CAT活性隨灌喂CMCE濃度的升高而增強(qiáng),并且高濃度組小鼠肝臟CAT活性顯著高于對照組(P0.05)；試驗(yàn)二探究了三種不同的類胡蘿卜素對小鼠生長、免疫和抗氧化性能的影響。48只ICR小鼠隨機(jī)分為4組,分別灌喂大豆油溶液(A組,對照組)、β-胡蘿卜素溶液(B組)、葉黃素溶液(C組)和CMCE溶液(D組)0.2mL/只/天。結(jié)果表明：1)就整個試驗(yàn)期來看,D組小鼠ADFI顯著高于對照組(P0.05), ADG和F/G各組之間無顯著差異(P0.05)；D組小鼠血清GLU和CHO的含量分別極顯著(P0.01)和顯著(P0.05)高于對照組,B和C組小鼠血清TG含量分別顯著(P0.05)和極顯著(P0.01)高于D組；2)B組小鼠血清IgG含量顯著高于D組(P0.05)；D組小鼠血液WBC, Lymph極顯著高于對照組(P0.01), Mon和Mon%顯著高于對照組(P0.05)；B組小鼠脾臟IL-2 mRNA的相對表達(dá)量顯著高于對照組(P0.05),D組小鼠脾臟IL-4和TNF-a mRNA的相對表達(dá)量顯著高于對照組和C組(P0.05)；3)B組小鼠血清SOD活性顯著高于C和D組(P0.05),血清CAT和GSH-Px活性分別顯著(P0.05)和極顯著(P0.01)高于D組；C組小鼠血清GSH-Px活性極顯著高于其他三組(P0.01)；C,D組小鼠血清MDA含量極顯著低于B組和對照組(P0.01)；相比于血清抗氧化指標(biāo),肝臟中SOD、CAT以及GPX1基因mRNA的相對表達(dá)量,各組之間無顯著差異(P0.05)。第三部分試驗(yàn)采用體外細(xì)胞培養(yǎng)的方法來探究經(jīng)初步純化后的CMCE對兩種腫瘤細(xì)胞(胃癌細(xì)胞MGC80-3和肝癌細(xì)胞HepG2)增殖的抑制作用。經(jīng)過硅膠柱層析初步純化后,CMCE中類胡蘿卜素的含量提高了12倍,再用細(xì)胞培養(yǎng)液將其配制成不同的濃度,分別為：60,80,100,120和140μg/mL。同時(shí)以順鉑作為陽性對照,以不含藥物的細(xì)胞培養(yǎng)液為陰性對照開展試驗(yàn)。結(jié)果表明：1)作用24h后,CMCE對MGC80-3細(xì)胞增殖的抑制作用呈濃度依賴性上升；48h和72h后,80和100μg/mL的CMCE對MGC80-3細(xì)胞增殖的抑制作用較強(qiáng)。2)對HepG2來說,與藥物共培養(yǎng)24h后,較高濃度的CMCE對HepG2細(xì)胞增殖的抑制作用較好；48h后,CMCE對HepG2細(xì)胞增殖的抑制作用呈濃度依賴性上升；72h后,120μg/mL的CMCE對HepG2細(xì)胞有較強(qiáng)的生長抑制作用。
【關(guān)鍵詞】：蛹蟲草類胡蘿卜素 提取 小鼠 生長 免疫 抗氧化
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S816
【目錄】：

• 摘要2-4
• Abstract4-6
• 符號說明6-10
• 第一章 文獻(xiàn)綜述10-21
• 1 類胡蘿卜素簡介10
• 2 類胡蘿卜素的生產(chǎn)工藝10-12
• 2.1 人工化學(xué)合成10-11
• 2.2 有機(jī)溶劑萃取11
• 2.3 超臨界流體萃取11-12
• 2.4 微生物發(fā)酵12
• 3 類胡蘿卜素對動物生理功能的影響12-16
• 3.1 β-胡蘿卜素對動物生理功能的影響12-13
• 3.2 葉黃素對動物生理功能的影響13
• 3.3 蝦青素對動物生理功能的影響13-14
• 3.4 番茄紅素對動物生理功能的影響14-15
• 3.5 植物類胡蘿卜素提取物對動物生理功能的影響15-16
• 4 蛹蟲草簡介16
• 5 蛹蟲草中的主要活性成分16-19
• 5.1 蟲草多糖16-17
• 5.2 蟲草素(腺苷)和蟲草酸(D-甘露醇)17
• 5.3 蟲草蛋白質(zhì)和氨基酸17
• 5.4 微量元素17-18
• 5.5 蛹蟲草類胡蘿卜素18-19
• 5.6 其他成分19
• 6 蟲草屬真菌的開發(fā)利用現(xiàn)狀和展望19-20
• 7 本課題的研究意義和研究內(nèi)容20-21
• 第二章 提取試驗(yàn) 蛹蟲草類胡蘿卜素的提取工藝優(yōu)化21-33
• 1 材料與方法21-25
• 1.1 材料與試劑21
• 1.2 儀器與設(shè)備21
• 1.3 方法21-24
• 1.3.1 蛹蟲草粉末的制備22
• 1.3.2 類胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)曲線方程的建立22
• 1.3.3 不同提取方法試驗(yàn)22-23
• 1.3.4 酸熱超聲提取法單因素試驗(yàn)23
• 1.3.5 正交試驗(yàn)23-24
• 1.3.6 驗(yàn)證性試驗(yàn)24
• 1.3.7 蛹蟲草類胡蘿卜素提取物的檢驗(yàn)24
• 1.4 數(shù)據(jù)分析方法24-25
• 2 結(jié)果與分析25-31
• 2.1 不同提取方法提取蛹蟲草類胡蘿卜素比較25-26
• 2.2 單因素試驗(yàn)結(jié)果26-28
• 2.3 正交試驗(yàn)結(jié)果28-30
• 2.4 試驗(yàn)驗(yàn)證結(jié)果30
• 2.5 蛹蟲草類胡蘿卜素提取物的檢驗(yàn)及含量測定30-31
• 3 討論31-32
• 4 小結(jié)32-33
• 第三章 灌喂小鼠試驗(yàn)33-59
• 試驗(yàn)一 不同濃度蛹蟲草類胡蘿卜素提取物對小鼠生長、免疫和抗氧化性能的影響33-45
• 1 材料與方法33-37
• 1.1 材料與儀器33-34
• 1.2 CMCE的制備和分析34-35
• 1.3 動物飼養(yǎng)管理35
• 1.4 試驗(yàn)方法35-37
• 1.4.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)35
• 1.4.2 平均日增重和平均日采食量統(tǒng)計(jì)35
• 1.4.3 樣品采集35-36
• 1.4.4 飼料干物質(zhì)和粗蛋白的表觀消化率以及血清生化指標(biāo)的測定36
• 1.4.5 小腸發(fā)育情況測定36
• 1.4.6 血清免疫球蛋白和血液白細(xì)胞數(shù)量的測定36
• 1.4.7 脾臟白細(xì)胞介素和腫瘤壞死因子mRNA相對定量的測定36-37
• 1.4.8 血清和肝臟抗氧化指標(biāo)的測定37
• 1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析37
• 2 結(jié)果37-45
• 2.1 蛹蟲草類胡蘿卜素提取物的制備和分析37-38
• 2.2 不同濃度蛹蟲草類胡蘿卜素提取物對小鼠生活狀態(tài)和生長性能的影響38
• 2.3 不同濃度蛹蟲草類胡蘿卜素提取物對小鼠干物質(zhì)及粗蛋白消化率和血清生化指標(biāo)的影響38-40
• 2.4 不同濃度蛹蟲草類胡蘿卜素提取物對小鼠十二指腸、空腸和回腸形態(tài)發(fā)育的影響40-41
• 2.5 不同濃度蛹蟲草類胡蘿卜素提取物對小鼠血清免疫球蛋白和血液免疫細(xì)胞的影響41-42
• 2.6 不同濃度蛹蟲草類胡蘿卜素提取物對小鼠脾臟IL-2、IL-4以及TNF-α mRNA相對表達(dá)量的影響42-43
• 2.7 不同濃度蛹蟲草類胡蘿卜素提取物對小鼠血清和肝臟抗氧化指標(biāo)的影響43-45
• 試驗(yàn)二 β-胡蘿卜素、葉黃素以及蛹蟲草類胡蘿卜素對小鼠生長、免疫和抗氧化性能的影響45-52
• 1 材料與方法45-48
• 1.1 材料與儀器45-46
• 1.2 動物飼養(yǎng)管理46
• 1.3 試驗(yàn)方法46-48
• 1.3.1 灌喂試驗(yàn)設(shè)計(jì)46-47
• 1.3.2 平均統(tǒng)日增重和平均日采食量計(jì)47
• 1.3.3 樣品采集47
• 1.3.4 血清肝功能、腎功能以及能量代謝指標(biāo)的測定47
• 1.3.5 血清免疫球蛋白和血液免疫細(xì)胞含量的測定47
• 1.3.6 脾臟白細(xì)胞介素2和4以及腫瘤壞死因子α、肝臟中抗氧化酶基因SOD、CAT以及GPX1 mRNA相對定量的測定47-48
• 1.3.7 血清抗氧化指標(biāo)的測定48
• 1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析48
• 2 結(jié)果48-52
• 2.1 三種不同類胡蘿卜素對小鼠生長性能的影響48-49
• 2.2 三種不同類胡蘿卜素對小鼠血清生化指標(biāo)的影響49-50
• 2.3 三種不同類胡蘿卜素對小鼠血清免疫球蛋白和血液免疫細(xì)胞的影響50
• 2.4 三種不同類胡蘿卜素對小鼠脾臟IL-2、IL-4以及TNF-α mRNA相對表達(dá)水平的影響50-51
• 2.5 不同種類胡蘿卜素對小鼠血清抗氧化指標(biāo)和肝臟SOD、CAT以及GPX1 mRNA相對表達(dá)水平的影響51-52
• 體內(nèi)試驗(yàn)結(jié)果討論52-57
• 1 類胡蘿卜素對小鼠生長性能的影響52-53
• 2 類胡蘿卜素對小鼠干物質(zhì)和粗蛋白表觀消化率以及血清中肝臟和腎臟代謝指標(biāo)的影響53-54
• 3 不同濃度蛹蟲草類胡蘿卜素提取物對小鼠小腸形態(tài)發(fā)育的影響54-55
• 4 類胡蘿卜素對小鼠血清免疫球蛋白和血液免疫細(xì)胞的影響55-56
• 5 類胡蘿卜素對小鼠脾臟IL-2、IL-4以及TNF-α mRNA的影響56
• 6 類胡蘿卜素對小鼠血清和肝臟抗氧化指標(biāo)的影響56-57
• 小結(jié)57-59
• 第四章 細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn) 蛹蟲草類胡蘿卜素對腫瘤細(xì)胞增殖的抑制作用59-66
• 1 材料與方法59-62
• 1.1 試劑與儀器59-60
• 1.2 蛹蟲草類胡蘿卜素粗提物的制備60
• 1.3 蛹蟲草類胡蘿卜素的純化60-61
• 1.4 蛹蟲草類胡蘿卜素含量的測定61
• 1.5 胃癌細(xì)胞MGC80-3和肝癌細(xì)胞Hpeg2的復(fù)蘇與傳代培養(yǎng)61
• 1.6 MTT試驗(yàn)探究蛹蟲草類胡蘿卜素提取物對腫瘤細(xì)胞的生長抑制作用61-62
• 1.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)62
• 2 結(jié)果62-64
• 2.1 蛹蟲草類胡蘿卜素含量的測定62
• 2.2 CMCE對MGC80-3細(xì)胞的生長抑制作用62-63
• 2.3 CMCE對HepG2細(xì)胞的生長抑制作用63-64
• 3 討論64-65
• 4 小結(jié)65-66
• 全文結(jié)論66-67
• 參考文獻(xiàn)67-73
• 附錄73-76
• 致謝76-78
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄78-79

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉少霞,馬慧,陳立靜,姜明蘭;硒對人工栽培蛹蟲草生長和組分的影響[J];遼寧農(nóng)業(yè)科學(xué);2001年02期

2 王莉,冉翠香;人工培植蛹蟲草技術(shù)要點(diǎn)[J];食用菌;2002年02期

3 于海波,鄭春芳;人工栽培蛹蟲草管理技術(shù)的改進(jìn)[J];食用菌;2004年01期

4 楊發(fā)國;北蛹蟲草制種防污技術(shù)[J];特種經(jīng)濟(jì)動植物;2004年04期

5 曹麗茹;馬妍;胡俊琴;張敏麗;;蛹蟲草栽培應(yīng)用研究[J];遼寧林業(yè)科技;2006年02期

6 ;蛹蟲草栽培創(chuàng)新工藝問世[J];農(nóng)村實(shí)用技術(shù)與信息;2007年07期

7 王曉云;;蛹蟲草用于秋冬進(jìn)補(bǔ)的探討[J];人參研究;2009年03期

8 李曉磊;李丹;譚克;趙s，

本文編號：1027015