本文關(guān)鍵詞：Nectin-4基因的原核表達(dá)及多克隆抗體制備

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【摘要】：根據(jù)Nectin-4基因序列設(shè)計(jì)特異性引物,進(jìn)行PCR擴(kuò)增,將其克隆至原核表達(dá)載體pGEX-4T-1中,經(jīng)PCR、酶切和測(cè)序鑒定,成功構(gòu)建了重組表達(dá)質(zhì)粒pGEX-4T-Nectin-4。將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸埃希氏菌Rosetta感受態(tài)細(xì)胞,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)目的蛋白。表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)SDS-PAGE和Western blot鑒定正確后,純化后免疫BALB/c小鼠,制備多克隆抗體血清,并利用瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)檢測(cè)其效價(jià)。SDS-PAGE結(jié)果表明該重組蛋白獲得高效表達(dá),表達(dá)的蛋白以包涵體形式存在。Western blot結(jié)果表明表達(dá)的蛋白能與GST單抗發(fā)生反應(yīng),具有較好的反應(yīng)原性。瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)結(jié)果表明制備的抗Nectin-4蛋白多克隆抗體效價(jià)達(dá)1∶8。由于Nectin-4是小反芻獸疫病毒新近發(fā)現(xiàn)的受體,這一研究為后續(xù)Nectin-4與小反芻獸疫病毒的相互作用研究奠定了一定基礎(chǔ)。
【作者單位】： 安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院;中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所;
【關(guān)鍵詞】： Nectin-基因 原核表達(dá) 多克隆抗體
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(31602063) 安徽省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(1508085QC60) 安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)穩(wěn)定和引進(jìn)人才科研項(xiàng)目(YJ2015-16) 中央級(jí)公益性科研院所基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)(2016JB12)
【分類號(hào)】：Q78;S852.65
【正文快照】： Nectin-4又名脊髓灰質(zhì)炎病毒受體相關(guān)蛋白,屬于免疫球蛋白超家族中的Nectin家族,該家族包括4個(gè)Nectin分子(Nectin 1~4)和5個(gè)Nectin樣分子(Nectin-like 1~5)[1]。Nectin家族成員能夠形成同源或異源二聚體參與鈣不依賴的細(xì)胞黏附過程,與細(xì)胞的遷移、增殖及神經(jīng)突觸的形成等功能

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本文編號(hào)：1022010