本文關鍵詞：豬輪狀病毒RT-LAMP檢測方法的建立及應用

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【摘要】：為了建立一種適用于豬輪狀病毒(PoRV)的逆轉錄-環(huán)介導等溫核酸擴增(RT-LAMP)的快速、靈敏檢測方法。依據(jù)GenBank上登錄的PoRV VP7基因保守序列,設計了6條特異性引物,通過對外引物與內引物濃度比、Bst DNA聚合酶濃度、Mg2+濃度、dNTP濃度和反應條件等進行優(yōu)化。結果顯示,當外引物與內引物濃度比為200nmol/L∶2 400nmol/L(1∶12)、Bst DNA聚合酶濃度為0.64 U/μL、Mg2+濃度為2.5 mmol/L、dNTP濃度為1.0mmol/L,在恒溫(60℃)條件下作用60min,擴增效果出現(xiàn)明顯"梯狀"條帶,同時對建立的RT-LAMP檢測方法進行特異性和敏感性驗證,其只有PoRV獲得特異性擴增條帶,與其他豬流行性腹瀉病毒、豬傳染性胃腸炎病毒、豬瘟病毒等無交叉反應,具有良好的特異性,最低檢測分子拷貝數(shù)為1.0×102拷貝/μL,具有極高的敏感性。反應結束后肉眼可見陽性擴增產物出現(xiàn)白色沉淀,加入SYBR GreenⅠ觀察顏色變化可以判定結果。該方法適用于野外、基層部門和海關快速檢測PoRV的新方法,在臨床上有良好的推廣意義。
【作者單位】： 貴州大學動物科學學院;貴州省動物疫病研究室;貴州省動物疫病預防控制中心;
【關鍵詞】： 豬輪狀病毒(PoRV) RT-LAMP 建立 應用
【基金】：貴州省科學技術廳農業(yè)攻關項目(黔科合NY[2015]3009-1號) 貴州省生豬質量安全工程技術研究中心建設項目(黔科合農C字[2011]4022號) “貴州省動物疫病防控與獸醫(yī)公共衛(wèi)生保障科技創(chuàng)新人才團隊”(黔科合人才團隊[2015]4016號)
【分類號】：S852.651
【正文快照】： 豬輪狀病毒(Porcine Rotarvirus,PoRV)屬于呼腸孤病毒科、輪狀病毒屬成員之一,為各種幼齡動物發(fā)生腹瀉的主要病原之一[1]。豬感染PoRV后以腹瀉、脫水、嘔吐、消瘦為主要特征[2]。各年齡的豬均易感,尤其以1周齡以內仔豬感染后癥狀最為嚴重,病死率可達100%,一旦暴發(fā)即可能呈地方

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本文編號：1020157