發(fā)布時間：2017-10-12 18:06

  本文關(guān)鍵詞：豬輪狀病毒RT-LAMP檢測方法的建立及應(yīng)用

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【摘要】：為了建立一種適用于豬輪狀病毒(PoRV)的逆轉(zhuǎn)錄-環(huán)介導(dǎo)等溫核酸擴增(RT-LAMP)的快速、靈敏檢測方法。依據(jù)GenBank上登錄的PoRV VP7基因保守序列,設(shè)計了6條特異性引物,通過對外引物與內(nèi)引物濃度比、Bst DNA聚合酶濃度、Mg2+濃度、dNTP濃度和反應(yīng)條件等進行優(yōu)化。結(jié)果顯示,當(dāng)外引物與內(nèi)引物濃度比為200nmol/L∶2 400nmol/L(1∶12)、Bst DNA聚合酶濃度為0.64 U/μL、Mg2+濃度為2.5 mmol/L、dNTP濃度為1.0mmol/L,在恒溫(60℃)條件下作用60min,擴增效果出現(xiàn)明顯"梯狀"條帶,同時對建立的RT-LAMP檢測方法進行特異性和敏感性驗證,其只有PoRV獲得特異性擴增條帶,與其他豬流行性腹瀉病毒、豬傳染性胃腸炎病毒、豬瘟病毒等無交叉反應(yīng),具有良好的特異性,最低檢測分子拷貝數(shù)為1.0×102拷貝/μL,具有極高的敏感性。反應(yīng)結(jié)束后肉眼可見陽性擴增產(chǎn)物出現(xiàn)白色沉淀,加入SYBR GreenⅠ觀察顏色變化可以判定結(jié)果。該方法適用于野外、基層部門和海關(guān)快速檢測PoRV的新方法,在臨床上有良好的推廣意義。
【作者單位】： 貴州大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院;貴州省動物疫病研究室;貴州省動物疫病預(yù)防控制中心;
【關(guān)鍵詞】： 豬輪狀病毒(PoRV) RT-LAMP 建立 應(yīng)用
【基金】：貴州省科學(xué)技術(shù)廳農(nóng)業(yè)攻關(guān)項目(黔科合NY[2015]3009-1號) 貴州省生豬質(zhì)量安全工程技術(shù)研究中心建設(shè)項目(黔科合農(nóng)C字[2011]4022號) “貴州省動物疫病防控與獸醫(yī)公共衛(wèi)生保障科技創(chuàng)新人才團隊”(黔科合人才團隊[2015]4016號)
【分類號】：S852.651
【正文快照】： 豬輪狀病毒(Porcine Rotarvirus,PoRV)屬于呼腸孤病毒科、輪狀病毒屬成員之一,為各種幼齡動物發(fā)生腹瀉的主要病原之一[1]。豬感染PoRV后以腹瀉、脫水、嘔吐、消瘦為主要特征[2]。各年齡的豬均易感,尤其以1周齡以內(nèi)仔豬感染后癥狀最為嚴(yán)重,病死率可達100%,一旦暴發(fā)即可能呈地方

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本文編號：1020157