發(fā)布時(shí)間：2017-10-12 14:19

  本文關(guān)鍵詞：鴨肝炎病毒PCR-ELISA檢測方法的建立

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【摘要】：為建立檢測鴨肝炎病毒(DHV)的PCR-ELISA方法,根據(jù)DHV VP1基因序列設(shè)計(jì)1對分別標(biāo)記生物素和地高辛的引物,采用固相雜交法,將生物素標(biāo)記的探針固定在酶標(biāo)板上,再與地高辛標(biāo)記的產(chǎn)物進(jìn)行雜交,并通過反復(fù)優(yōu)化確定了10 mg/m L鏈霉親和素包被液、10 g/L BSA封閉液、0.5 pmol/L探針、1∶4 000稀釋的酶標(biāo)二抗及最適雜交時(shí)間等最佳反應(yīng)條件,建立了DHV PCR-ELISA檢測方法。該方法與鴨腸炎病毒、鴨細(xì)小病毒和鴨疫里氏桿菌等無交叉反應(yīng),說明該方法特異性強(qiáng);敏感性試驗(yàn)結(jié)果表明,PCR-ELISA最低能檢出0.37 pg/L的DHV RNA,其敏感度比常規(guī)PCR高100倍。用該方法對50份雛鴨肝提取的RNA樣本進(jìn)行檢測,陽性檢出率為82%,較RT-PCR檢出率高46%。結(jié)果表明,該P(yáng)CR-ELISA方法具有特異、敏感、安全的特點(diǎn),從而為鴨病毒性肝炎流行病學(xué)研究及臨床診斷提供了新的途徑。
【作者單位】： 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院;吉林正方農(nóng)牧股份有限公司;
【關(guān)鍵詞】： 鴨肝炎病毒 VP基因 PCR-ELISA
【基金】：國家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項(xiàng)(CARS-43) 吉林省科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(20111820) 國家星火計(jì)劃項(xiàng)目(2012GA-660003)
【分類號】：S852.65
【正文快照】： 鴨病毒性肝炎(duck viral hepatitis,DVH)是一種由鴨肝炎病毒(duck hepatitis virus,DHV)引起的傳播速度快、致病性強(qiáng)的急性傳染病。該病多表現(xiàn)為雛鴨肝損傷和急性敗血癥[1]。近幾年,由于DVH傳播迅速、致病性強(qiáng)、血清型變異多,嚴(yán)重制約了養(yǎng)鴨業(yè)的發(fā)展。目前按血清型DHV可以分

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