發(fā)布時間：2017-10-12 14:19

  本文關鍵詞：鴨肝炎病毒PCR-ELISA檢測方法的建立

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【摘要】：為建立檢測鴨肝炎病毒(DHV)的PCR-ELISA方法,根據(jù)DHV VP1基因序列設計1對分別標記生物素和地高辛的引物,采用固相雜交法,將生物素標記的探針固定在酶標板上,再與地高辛標記的產(chǎn)物進行雜交,并通過反復優(yōu)化確定了10 mg/m L鏈霉親和素包被液、10 g/L BSA封閉液、0.5 pmol/L探針、1∶4 000稀釋的酶標二抗及最適雜交時間等最佳反應條件,建立了DHV PCR-ELISA檢測方法。該方法與鴨腸炎病毒、鴨細小病毒和鴨疫里氏桿菌等無交叉反應,說明該方法特異性強;敏感性試驗結果表明,PCR-ELISA最低能檢出0.37 pg/L的DHV RNA,其敏感度比常規(guī)PCR高100倍。用該方法對50份雛鴨肝提取的RNA樣本進行檢測,陽性檢出率為82%,較RT-PCR檢出率高46%。結果表明,該PCR-ELISA方法具有特異、敏感、安全的特點,從而為鴨病毒性肝炎流行病學研究及臨床診斷提供了新的途徑。
【作者單位】： 吉林農(nóng)業(yè)大學動物科學技術學院;吉林正方農(nóng)牧股份有限公司;
【關鍵詞】： 鴨肝炎病毒 VP基因 PCR-ELISA
【基金】：國家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)技術體系建設專項(CARS-43) 吉林省科技發(fā)展計劃項目(20111820) 國家星火計劃項目(2012GA-660003)
【分類號】：S852.65
【正文快照】： 鴨病毒性肝炎(duck viral hepatitis,DVH)是一種由鴨肝炎病毒(duck hepatitis virus,DHV)引起的傳播速度快、致病性強的急性傳染病。該病多表現(xiàn)為雛鴨肝損傷和急性敗血癥[1]。近幾年,由于DVH傳播迅速、致病性強、血清型變異多,嚴重制約了養(yǎng)鴨業(yè)的發(fā)展。目前按血清型DHV可以分

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