本文關(guān)鍵詞：三種豬小DNA病毒在豬不同組織中的檢測研究

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【摘要】：近年來,隨著分子生物學(xué)技術(shù)在病毒學(xué)研究中的廣泛應(yīng)用,多種新的病原在豬群中被發(fā)現(xiàn),尤其是小DNA病毒直接或間接地給養(yǎng)豬業(yè)帶來了巨大的危害。豬圓環(huán)病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)、豬細(xì)環(huán)病毒(Porcine torque sus tenovirus,TTSuV)以及豬博卡病毒(Porcine bocavirus,PBoV)都屬于小DNA病毒,其基因組序列全長均在1.7kb-5.9kb之間。目前對于TTSuV和PBoV的直接致病性和復(fù)制機(jī)理尚不清楚。許多研究表明,在患有PMWS的病豬中,TTSuV和PBoV的檢出率明顯高于正常豬群,可能這三種小DNA病毒之間存在著某種協(xié)同作用。本研究分別對疑似PCV2感染病豬的不同組織臟器進(jìn)行PCV2、TTSuV和PBoV的PCR檢測,以期為后續(xù)研究這三種小DNA病毒在引發(fā)疾病方面是否存在協(xié)同作用奠定基礎(chǔ),同時(shí)也為研究TTSuV和PBoV的發(fā)病機(jī)制提供一定的依據(jù)。本研究對江西省11個(gè)縣市采集到的疑似豬圓環(huán)病毒2型感染的不同階段同一病豬的肺臟、脾臟、小腸、腹股溝淋巴結(jié)和血液樣品169份分別進(jìn)行PCV2、TTSuV和PBoV的PCR檢測,檢測結(jié)果顯示,PCV2、TTSuV和PBoV在江西地區(qū)豬群普遍感染,且不同地區(qū)的感染率不一。PCV2陽性病料數(shù)為165份,陽性率為97.63%;PBo V陽性病料數(shù)為77份,陽性率為45.56%;TTSuV陽性病料數(shù)為85份,陽性率為50.3%,其中TTSuV1的陽性率為21.3%(36/169),TTSuV2的陽性率為40.83%(69/169),TTSuV1和TTSuV2的共感染率為11.83%(20/169)。PCV2和PBoV共感染樣品數(shù)為77份,感染率為45.56%,PCV2和TTSuV共感染樣品數(shù)為83份,感染率為49.11%,PBoV和TTSuV共感染樣品數(shù)與PCV2、PBoV和TTSuV三者共同感染樣品數(shù)均為43份,感染率為25.44%。為了解三種小DNA病毒在不同生長階段的感染情況,本研究對169頭各生長階段豬的組織樣品進(jìn)行三種小DNA病毒的檢測,結(jié)果顯示,PCV2在不同生長階段的檢出率均在95%以上,其中育肥豬檢出率達(dá)到了100%;PBoV在保育豬中的檢出率最高,其次是哺乳豬和育肥豬;TTSuV在育肥豬的檢出率最高,檢測率會(huì)隨著日齡的增長而升高。為了解三種小DNA病毒在不同組織器官中的感染情況,本研究對169頭豬的不同組織器官分別進(jìn)行三種小DNA病毒的檢測,結(jié)果顯示,在165份PCV2陽性樣品中,腹股溝淋巴結(jié)中的陽性樣品數(shù)最多,為146份,陽性率達(dá)到了88.48%,陽性率最低的為小腸(112/165,67.88%);在77份PBoV陽性樣品中,陽性率最高的為脾臟(46/77,59.74%)和小腸(44/77,57.14%)最低的為血液(36/77,46.75%);不同組織器官中TTSuV、TTSuV1、TTSuV2以及TTSuV1和TTSuV2共感染的檢出率呈現(xiàn)出相同的趨勢,血液中的檢出率顯著高于其他組織器官。參考GenBank公布的序列設(shè)計(jì)一對PBoV NP1基因擴(kuò)增引物,通過T-A克隆、序列測定與拼接獲得了3株P(guān)BoV NP1基因序列,長度均為657 bp。系統(tǒng)進(jìn)化樹表明,試驗(yàn)獲得的三株豬博卡病毒NP1基因在同一分支上,與中國湖北SX株(HQ223038)和上海H18株(HQ291308)親緣關(guān)系近,與引入的人博卡病毒、猩猩博卡病毒、犬細(xì)小病毒、牛細(xì)小病毒以及豬細(xì)小病毒屬于不同的分支,親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。所引入的豬博卡病毒毒株形成三個(gè)分支,不同分支之間的親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。試驗(yàn)獲得的三株豬博卡病毒NP1基因選取一株P(guān)BoV NP1基因序列JA/JX/NP1進(jìn)行蛋白分析發(fā)現(xiàn),JA/JX/NP1編碼蛋白含219個(gè)氨基酸,該蛋白抗原性較好,抗原位點(diǎn)主要位點(diǎn)1-94、100-114、119-166、195-207處。JA/JX/NP1編碼蛋白親水性較好,大部分區(qū)域?yàn)橛H水性,親水性較大的區(qū)域主要是:1-93、99-156、159-170、172-205等。
【關(guān)鍵詞】：PCV2 PBoV TTSuV NP1 序列分析
【學(xué)位授予單位】：江西農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S858.28
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-10
• 縮略詞表10-11
• 第一章 豬圓環(huán)病毒11-20
• 1 PCV的發(fā)現(xiàn)11
• 2 PCV的分類11
• 3 PCV的病原特征11-12
• 4 PCV的基因組結(jié)構(gòu)12
• 5 PCV的致病機(jī)理12
• 6 PCV的流行病學(xué)12-14
• 7 豬圓環(huán)病毒感染相關(guān)疾病14-16
• 7.1 斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征（PMWS）14-15
• 7.2 豬皮炎腎病綜合征（PNDS）15
• 7.3 母豬繁殖障礙15
• 7.4 豬呼吸道綜合征（PRDC）15
• 7.5 增生性壞死性肺炎（PNP）15-16
• 7.6 仔豬先天性震顫（CT）16
• 7.7 腸炎16
• 8 PCV2感染診斷相關(guān)方法16-19
• 8.1 血清學(xué)診斷方法16-17
• 8.2 病原學(xué)診斷方法17-19
• 9 豬圓環(huán)病毒感染相關(guān)疾病的防控19-20
• 第二章 豬細(xì)環(huán)病毒20-23
• 1 發(fā)現(xiàn)史20
• 2 分類20
• 3 病原學(xué)20-21
• 3.1 理化特性20
• 3.2 病毒培養(yǎng)20
• 3.3 基因組結(jié)構(gòu)20-21
• 3.4 致病性21
• 4 流行病學(xué)21-22
• 5 診斷方法22-23
• 5.1 病原學(xué)診斷22
• 5.2 血清學(xué)診斷方法22-23
• 第三章 豬博卡病毒23-27
• 1 概述23
• 2 分類23
• 3 病原學(xué)23-24
• 4 致病性24
• 5 流行病學(xué)24-25
• 6 診斷技術(shù)25-27
• 6.1 PCR25
• 6.2 熒光定量PCR25-26
• 6.3 間接免疫熒光法26
• 6.4 環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)26
• 6.5 ELISA26-27
• 第四章 江西地區(qū)PCV2、TTSuV和PBoV的感染情況調(diào)查27-42
• 1 材料與方法27-33
• 1.1 試驗(yàn)材料27
• 1.2 儀器設(shè)備27-28
• 1.3 溶液的配制28
• 1.4 臨床樣品的采集與保存28-29
• 1.5 引物合成29
• 1.6 病毒總DNA提取29-30
• 1.7 目的片段PCR擴(kuò)增與檢測30-32
• 1.8 PCR產(chǎn)物膠回收32
• 1.9 目的基因片段的克隆32
• 1.10 重組質(zhì)粒菌液PCR鑒定32-33
• 1.11 擴(kuò)增片段測序鑒定33
• 2 結(jié)果33-39
• 2.1 PCV2、TTSuV和PBoV檢測結(jié)果33-35
• 2.2 PCV2、TTSuV和PBoV擴(kuò)增片段的測序分析35
• 2.3 不同地區(qū)PCV2、TTSuV和PBoV感染情況統(tǒng)計(jì)分析35-37
• 2.4 不同生長階段PCV2、TTSuV和PBoV感染情況統(tǒng)計(jì)分析37
• 2.5 不同組織器官中PCV2、TTSuV和PBoV感染情況統(tǒng)計(jì)分析37-38
• 2.6 檢測樣品中PCV2、PBoV和TTSuV共感染情況統(tǒng)計(jì)分析38-39
• 3 討論39-42
• 3.1 三種小DNA病毒在江西地區(qū)的感染情況39-40
• 3.2 三種小DNA病毒在不同生長階段豬中的檢測40-41
• 3.3 三種小DNA病毒在不同組織器官中的檢測41
• 3.4 三種小DNA病毒之間的共感染41-42
• 第五章 PBoV江西分離株NP1基因的克隆、測序及分析42-51
• 1 材料42
• 1.1 樣品來源42
• 1.2 試劑42
• 1.3 儀器設(shè)備42
• 2 方法42-46
• 2.1 引物設(shè)計(jì)42-43
• 2.2 總DNA的提取43
• 2.3 PBoV NP1基因擴(kuò)增43
• 2.4 膠回收43
• 2.5 T-A克隆43
• 2.6 重組質(zhì)粒菌液PCR鑒定43-44
• 2.7 PBoV NP1基因陽性克隆菌液的序列測定44
• 2.8 PBoV NP1基因序列進(jìn)化樹的構(gòu)建44-46
• 2.9 PBoV NP1基因編碼蛋白質(zhì)性質(zhì)、結(jié)構(gòu)以及功能預(yù)測46
• 3 結(jié)果46-50
• 3.1 樣品PBoV NP1基因PCR擴(kuò)增結(jié)果46-47
• 3.2 PBoV NP1基因進(jìn)化樹的構(gòu)建47-48
• 3.3 PBoV NP1基因編碼蛋白質(zhì)性質(zhì)、結(jié)構(gòu)以及功能分析48-50
• 4 討論50-51
• 全文結(jié)論51-52
• 參考文獻(xiàn)52-62
• 致謝62-63
• 附錄63-65

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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本文編號：1005668