本文關(guān)鍵詞：乙型腦炎病毒在Vero細(xì)胞上的傳代適應(yīng)性及毒種庫的建立

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【摘要】：目的分析乙型腦炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)在Vero細(xì)胞上的傳代適應(yīng)性,進(jìn)行培養(yǎng)條件及接種方式的優(yōu)化,并建立毒種庫。方法將JEV P3株在Vero細(xì)胞上連續(xù)適應(yīng)性傳至20代(P3V1~P3V20),采用小鼠法檢測P3V2、P3V3、P3V4的病毒滴度。優(yōu)化JEV靜置培養(yǎng)條件(維持液p H值、培養(yǎng)溫度、MOI)及接種方式(單層接種法、混合接種法),并進(jìn)行培養(yǎng)規(guī)模的放大。采用RT-PCR法擴(kuò)增P3V0、P3V1、P3V5、P3V10、P3V15及P3V20代病毒的E基因片段,并進(jìn)行測序分析。建立JEV毒種庫,并進(jìn)行全面檢定。結(jié)果 JEV在Vero細(xì)胞上傳代適應(yīng)性良好,各代次病毒滴度均大于8.5 lg LD50/ml。最適培養(yǎng)條件為:病毒維持液p H值為7.6,培養(yǎng)溫度為34℃,病毒MOI為0.1;最佳接種方式為:單層接種法。在不同培養(yǎng)規(guī)模時(shí),病毒滴度變化較小,且均維持在較高水平。P3V0、P3V1、P3V5、P3V10、P3V15及P3V20各代次間E基因片段同源性為100%,傳代穩(wěn)定性良好。建立的毒種庫的鑒別試驗(yàn)、無菌檢查、支原體檢查、病毒滴定、病毒外源因子檢查及免疫原性檢查結(jié)果均符合《中國藥典》三部(2010版)相關(guān)要求。結(jié)論已完成JEV在Vero細(xì)胞上的適應(yīng)性傳代培養(yǎng),并成功建立毒種庫,為實(shí)現(xiàn)以Vero細(xì)胞為基質(zhì)的JEV疫苗的研發(fā)奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 長春生物制品研究所有限責(zé)任公司;長春祈健生物制品有限公司;
【關(guān)鍵詞】： 乙型腦炎病毒 Vero細(xì)胞 傳代 適應(yīng)性 毒種庫
【分類號】：R373.31;R392-33
【正文快照】： 乙型腦炎(Japanese encephalitis,JE),又稱日本乙型腦炎,由乙型腦炎病毒(JE virus,JEV)感染引起,該病缺乏有效的治療手段,目前仍以預(yù)防為主,研發(fā)安全、穩(wěn)定、高效的乙型腦炎疫苗是預(yù)防該病的主要任務(wù)。乙型腦炎疫苗生產(chǎn)過程中的細(xì)胞基質(zhì)主要為鼠腦、地鼠腎細(xì)胞和Vero細(xì)胞,由于

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本文編號：991608