本文關(guān)鍵詞：表達HIV-1 gag重組雞痘病毒的構(gòu)建與篩選

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【摘要】：構(gòu)建并篩選表達HIV-1 gag蛋白的重組雞痘病毒,并對其進行鑒定。首先設(shè)計引物通過PCR技術(shù)擴增HIV-1 gag基因,將其連接到pMD18-T載體上,測序正確后將其克隆入本實驗室自行構(gòu)建的雞痘病毒穿梭載體pTKET中,獲得重組質(zhì)粒pTKET-HIV gag。然后將其與雞痘病毒FPV282E4株共轉(zhuǎn)染原代雞胚成纖維細胞(CEF)進行同源重組,以增強型綠色熒光蛋白(EGFP)為篩選標(biāo)記,通過噬斑篩選獲得重組病毒,應(yīng)用PCR,RT-PCR,Western blot方法對重組病毒進行鑒定和遺傳穩(wěn)定性分析。結(jié)果:通過10次噬斑篩選,PCR檢測表明目的基因已整合到重組雞痘病毒基因組中,RT-PCR,Western blot結(jié)果表明HIV-1 gag在感染細胞內(nèi)成功表達且具有抗原性。連續(xù)傳代20次,PCR,RT-PCR,Western blot均能檢測到外源基因的整合、轉(zhuǎn)錄和表達,且未能擴增出FPV-TK基因,表明重組病毒遺傳穩(wěn)定性良好,而且病毒已經(jīng)純化。結(jié)論:成功獲得表達HIV-1gag的重組雞痘病毒,為進一步免疫試驗研究奠定基礎(chǔ)。
【作者單位】： 長春中醫(yī)藥大學(xué);軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院軍事獸醫(yī)研究所省部共建吉林省人獸共患病預(yù)防與控制重點實驗室;
【關(guān)鍵詞】： 重組雞痘病毒 HIV- gag 強型熒光蛋白 遺傳穩(wěn)定性
【基金】：國家科技重大專項(2012ZX10001005-006) 國家自然科學(xué)基金(81001342) 中國博士后科學(xué)基金(20110491803、2012T50859)資助項目
【分類號】：R373
【正文快照】： 中國衛(wèi)生部、聯(lián)合國艾滋病規(guī)劃署(UNAIDS)和世界衛(wèi)生組織(WHO)聯(lián)合對2011年中國艾滋病疫情進行了估計,截至2011年底,估計中國存活艾滋病病毒感染者和艾滋病病人(PLHIV)78萬人(62~94萬人)。艾滋病已經(jīng)嚴(yán)重影響了中國經(jīng)濟發(fā)展和社會穩(wěn)定。但是由于HIV基因組的可塑性為其高度變異

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本文編號：987917