本文關(guān)鍵詞：缺失TC7L-TK2L基因減毒天壇株痘苗病毒構(gòu)建及篩選

  更多相關(guān)文章： 重組天壇株痘苗病毒 病毒載體 同源重組 TCL-TKL基因

【摘要】：目的通過(guò)敲除天壇株痘苗病毒(Vaccinia virus Tiantan strain,VTT)的復(fù)制非必需基因TC7L-TK2L,并結(jié)合雙標(biāo)記篩選及外源篩選標(biāo)記敲除技術(shù)構(gòu)建TC7L-TK2L基因缺失的VTT弱毒株rVTT-TC7L--TK2L-。方法人工合成含有痘病毒早晚期復(fù)合強(qiáng)啟動(dòng)子pE/L和外源篩選標(biāo)記增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(enhance green fluorescent protein,EGFP)的重組臂,構(gòu)建穿梭質(zhì)粒pTC7L-TK2L-EGFP,再與VTT共轉(zhuǎn)染BHK-21細(xì)胞,通過(guò)連續(xù)篩選10次,獲得含有篩選標(biāo)記的重組痘苗病毒rVTT-TC7L--TK2L--EGFP+;利用Cre/loxp系統(tǒng)敲除EGFP,連續(xù)篩選10次,獲得無(wú)篩選標(biāo)記的重組痘苗病毒rVTT-TC7L--TK2L-,用PCR方法對(duì)rVTT-TC7L--TK2L-進(jìn)行鑒定和遺傳穩(wěn)定性檢測(cè),用電鏡觀察病毒形態(tài)變化,并通過(guò)繪制生長(zhǎng)曲線觀察病毒在細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制情況。結(jié)果 PCR結(jié)果表明,成功構(gòu)建了重組痘苗病毒rVTT-TC7L--TK2L-,且具有良好的遺傳穩(wěn)定性;電鏡觀察痘苗病毒缺失TC7L-TK2L基因未影響病毒形態(tài);生長(zhǎng)曲線顯示敲除TC7L-TK2L基因后病毒毒力顯著下降,但不影響病毒的正常復(fù)制。結(jié)論成功構(gòu)建了痘苗病毒減毒株rVTT-TC7L--TK2L-,該重組痘苗具有良好的遺傳穩(wěn)定性且毒力減弱。
【作者單位】： 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院;軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院軍事獸醫(yī)研究所;吉林省腫瘤醫(yī)院頭頸外一科;
【關(guān)鍵詞】： 重組天壇株痘苗病毒 病毒載體 同源重組 TCL-TKL基因
【基金】：國(guó)家863計(jì)劃項(xiàng)目(No.2012AA02A407) 國(guó)家新藥創(chuàng)制科技重大專項(xiàng)(No.2014ZX09304314-002) 國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No.81101140) 吉林省產(chǎn)業(yè)技術(shù)創(chuàng)新戰(zhàn)略聯(lián)盟項(xiàng)目(No.20140309006YY) 吉林省重點(diǎn)科技攻關(guān)項(xiàng)目(No.20130206041NY)
【分類號(hào)】：R392
【正文快照】： 3.吉林省腫瘤醫(yī)院頭頸外一科,吉林長(zhǎng)春130021)***痘苗病毒(vaccina virus,VACV)屬于痘病毒科(Poxviridae)正痘病毒屬(Orthopoxvirus),具有大型雙鏈DNA基因組并在細(xì)胞胞漿內(nèi)復(fù)制[1]。目前VACV已廣泛應(yīng)用于基因工程疫苗載體及外源基因表達(dá)系統(tǒng)等研究領(lǐng)域[2-6]。VACV編碼許多非必

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 王宇航;李霄;王浩然;闞式紱;王卓越;齊延新;吳娜;杜壽文;金寧一;;缺失E3L基因減毒天壇株痘苗病毒的構(gòu)建及篩選[J];中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào);2011年11期

2 盛媛;王浩然;胡寧寧;陳智飛;王宏宇;姜爽;周曄;李一權(quán);李霄;金寧一;;天壇株痘苗病毒基因缺失弱毒株的構(gòu)建及鑒定[J];中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào);2014年03期

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前6條

1 Thiago Lima Le嗾o;Flávio Guimar嗾es da Fonseca;;Subversion of cellular stress responses by poxviruses[J];World Journal of Clinical Infectious Diseases;2014年04期

2 劉麗;汪巨峰;李波;;天花疫苗的研究現(xiàn)狀和進(jìn)展[J];中國(guó)藥事;2013年11期

3 盛媛;王浩然;胡寧寧;陳智飛;王宏宇;姜爽;周曄;李一權(quán);李霄;金寧一;;天壇株痘苗病毒基因缺失弱毒株的構(gòu)建及鑒定[J];中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào);2014年03期

4 肖朋朋;劉昊;閻富龍;陳智飛;朱羿龍;辛舒;王茂鵬;靖杰;魯會(huì)軍;金寧一;;重組痘苗病毒rVTT-JEVE理化特性研究[J];中國(guó)病原生物學(xué)雜志;2014年07期

5 王宏宇;徐一鳴;盛媛;李一權(quán);閻富龍;趙權(quán);李霄;金寧一;;四聯(lián)重組痘苗病毒的構(gòu)建及篩選[J];中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào);2014年09期

6 姜爽;闞式紱;胡寧寧;陳智飛;李一權(quán);周曄;李霄;孫麗麗;金寧一;;缺失TA35R基因減毒天壇株痘苗病毒的構(gòu)建及篩選[J];中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào);2014年12期

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 吳詩(shī)坡;基于重組腺病毒載體的烈性病原體疫苗研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2013年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 王宇航;TE3L/TE4L缺失型天壇株痘苗病毒的構(gòu)建及免疫原性分析[D];吉林大學(xué);2012年

2 杜壽文;HIV復(fù)合表位核酸和痘苗病毒載體疫苗構(gòu)建及免疫原性研究[D];吉林大學(xué);2012年

3 盛媛;基因缺失天壇株痘苗病毒弱毒載體的構(gòu)建及鑒定[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

4 王宏宇;八聯(lián)重組痘苗病毒天壇株的構(gòu)建及篩選[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前7條

1 金奇,陳悅,劉絳光,黎志良,金冬雁,侯云德;我國(guó)痘苗病毒疫苗株(天壇)25kb核苷酸序列及其與非疫苗株(WR)差異的比較[J];病毒學(xué)報(bào);1988年04期

2 陳南海,侯云德;我國(guó)痘苗病毒天壇株與WR株基因組的差異主要分布在其外側(cè)區(qū)[J];病毒學(xué)報(bào);1992年04期

3 婁元梅，阮力，，朱既明;痘苗病毒毒力相關(guān)基因的研究進(jìn)展[J];病毒學(xué)報(bào);1996年01期

4 金奇,陳南海,姚二梅,黃靜,侯云德;痘苗病毒天壇株基因組旁側(cè)區(qū)結(jié)構(gòu)及開(kāi)放讀碼框架的分析[J];病毒學(xué)報(bào);1997年01期

5 吳壯,徐軍;Cre/Loxp位點(diǎn)重組酶系統(tǒng)在疾病動(dòng)物模型建立中的應(yīng)用[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).呼吸系統(tǒng)分冊(cè);2004年04期

6 金寧一,王莉馨,羅坤,秦云龍,王宏偉,張應(yīng)玖,李萍;利用中國(guó)流行株HIV-1 Gag重組痘苗病毒與核酸疫苗免疫的新程序[J];中國(guó)生物制品學(xué)雜志;2001年02期

7 王宇航;李霄;王浩然;闞式紱;王卓越;齊延新;吳娜;杜壽文;金寧一;;缺失E3L基因減毒天壇株痘苗病毒的構(gòu)建及篩選[J];中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào);2011年11期

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 陳南海，白宏?yáng)|;關(guān)于痘苗病毒的毒力[J];中華實(shí)驗(yàn)和臨床病毒學(xué)雜志;1994年01期

2 楊潔;痘苗病毒的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)及應(yīng)用[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).病毒學(xué)分冊(cè);1996年02期

3 ;痘苗病毒治療癌癥效果好[J];大眾科技;2008年02期

4 許滌沙;劉大衛(wèi);;與接種痘苗士兵發(fā)生性接觸后致痘苗病毒感染1例報(bào)告[J];中國(guó)疫苗和免疫;2010年05期

5 朱蓉;黃維金;嚴(yán)子林;溫智恒;王文波;周艷;王佑春;俞永新;;痘苗病毒弱毒株廣9株對(duì)動(dòng)物的致病力研究[J];中國(guó)病毒病雜志;2011年03期

6 郝明強(qiáng);田厚文;;溶瘤痘苗病毒的研究進(jìn)展[J];生物技術(shù)通訊;2012年03期

7 劉強(qiáng);齊香榮;朱蓉;黃維金;阮力;李保衛(wèi);邵榮光;王佑春;;利用活體成像術(shù)對(duì)痘苗病毒小鼠體內(nèi)生物分布和表達(dá)的研究[J];中國(guó)病毒病雜志;2013年04期

8 ;為什么種痘 后不發(fā)痘?[J];赤腳醫(yī)生雜志;1973年03期

9 方繼明;痘苗病毒作為真核載體的研究現(xiàn)狀及展望[J];病毒學(xué)報(bào);1986年01期

10 宇文鎬,侯云德,黎志良;利用大腸桿菌質(zhì)粒檢測(cè)與分離痘苗病毒的啟動(dòng)子[J];病毒學(xué)報(bào);1987年03期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前7條

1 闞式紱;金寧一;李霄;劉妍;高鵬;徐曉紅;賈鵬;溫中梅;;實(shí)驗(yàn)室內(nèi)痘苗病毒的危險(xiǎn)性分析[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜傳染病學(xué)分會(huì)第七屆全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)暨第十三次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集（上冊(cè)）[C];2009年

2 俞永新;;痘苗病毒廣9株作為重組疫苗載體的研究[A];第五次全國(guó)免疫診斷暨疫苗學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2011年

3 朱蓉;黃維金;王佑春;俞永新;;痘苗病毒弱毒株廣9株的免疫原性分析[A];第五次全國(guó)免疫診斷暨疫苗學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2011年

4 丁明孝;于文斗;于勤;翟中和;;痘苗病毒復(fù)制與中間纖維的關(guān)系[A];海峽兩岸電子顯微學(xué)研討會(huì)論文專集[C];1992年

5 杜壽文;李昌;王宇航;劉存霞;任大勇;李沂;秦艷青;張軒源;金寧一;;新型痘苗病毒穿梭載體的構(gòu)建及評(píng)價(jià)[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物傳染病學(xué)分會(huì)第十二次人獸共患病學(xué)術(shù)研討會(huì)暨第六屆第十四次教學(xué)專業(yè)委員會(huì)論文集[C];2012年

6 王宇航;李霄;闞式紱;王卓越;齊延新;杜壽文;金寧一;;E3L缺失型天壇株痘苗病毒減毒載體的構(gòu)建及篩選[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物傳染病學(xué)分會(huì)第四次豬病防控學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2010年

7 朱立新;劉晶;李迎春;孔玉英;STAIB Caroline;SUTTER Gerd;汪垣;李光地;;HCV E2的復(fù)雜糖化依賴于全長(zhǎng)核心蛋白序列[A];中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)會(huì)第八屆會(huì)員代表大會(huì)暨全國(guó)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2001年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 記者 常麗君;痘苗病毒治療癌癥效果好[N];科技日?qǐng)?bào);2007年

2 趙立;痘苗病毒有助于治療癌癥[N];農(nóng)村醫(yī)藥報(bào)（漢）;2009年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

1 盛媛;基因缺失天壇株痘苗病毒弱毒載體的構(gòu)建及鑒定[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

2 王宇航;TE3L/TE4L缺失型天壇株痘苗病毒的構(gòu)建及免疫原性分析[D];吉林大學(xué);2012年

3 杜壽文;HIV復(fù)合表位核酸和痘苗病毒載體疫苗構(gòu)建及免疫原性研究[D];吉林大學(xué);2012年

4 陳勇毅;攜帶TRAIL-IETD-IL24雙基因的溶瘤痘苗病毒靶向治療癌癥的研究[D];浙江理工大學(xué);2013年

5 王金禮;新型腫瘤靶向性溶瘤痘苗病毒VV_△TK_△N1L-RFP對(duì)小鼠4T1乳腺癌模型的治療作用[D];鄭州大學(xué);2014年

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