發(fā)布時(shí)間：2017-10-05 13:32

  本文關(guān)鍵詞：結(jié)核分枝桿菌1-脫氧-D-木酮糖-5-磷酸還原異構(gòu)酶抑制劑高通量篩選模型的建立與應(yīng)用

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【摘要】：目的建立1-脫氧-D-木酮糖-5-磷酸還原異構(gòu)酶抑制劑的高通量篩選模型,從不同來源的樣品中篩選該酶抑制劑,以期獲得作用于該靶點(diǎn)的全新作用機(jī)制的抗結(jié)核藥物先導(dǎo)物。方法以結(jié)核分枝桿菌H37Rv基因組為模板,克隆基因dxr構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pET28a(+)::dxr;IPTG誘導(dǎo)表達(dá)并經(jīng)Ni2+親和層析柱純化得到具有天然酶活性的1-脫氧-D-木酮糖-5-磷酸還原異構(gòu)酶;基于該酶促反應(yīng)底物NADPH在340nm波長下具有光吸收的原理,建立和優(yōu)化酶活測定體系,構(gòu)建并評(píng)價(jià)酶抑制劑的高通量篩選模型;應(yīng)用此模型進(jìn)行酶抑制劑篩選并進(jìn)行抑酶活性及抗菌活性評(píng)價(jià)。結(jié)果成功得到具有天然酶活性的1-脫氧-D-木酮糖-5-磷酸還原異構(gòu)酶,構(gòu)建了1-脫氧-D-木酮糖-5-磷酸還原異構(gòu)酶抑制劑的高通量篩選模型并得到3個(gè)抑酶活性較高的陽性化合物,其中化合物IMB-DXR-B1為該酶的反競爭性抑制劑,其Ki值為6.2μmol/L,IC50為29.5μmol/L,該化合物對于結(jié)核分枝桿菌H37Rv的MIC為32μg/mL。結(jié)論成功構(gòu)建了穩(wěn)定性好、靈敏度高的結(jié)核分枝桿菌1-脫氧-D-木酮糖-5-磷酸還原異構(gòu)酶抑制劑的高通量篩選模型,篩選得到具有抗結(jié)核活性的1-脫氧-D-木酮糖-5-磷酸還原異構(gòu)酶抑制劑,為獲得全新作用靶點(diǎn)的新型抗結(jié)核藥物奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)藥生物技術(shù)研究所;寧夏醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 結(jié)核分枝桿菌 -脫氧-D-木酮糖--磷酸還原異構(gòu)酶 篩選模型 抑制劑
【基金】：十二五國家重大專項(xiàng)“重大新藥創(chuàng)制”(2012ZX09301002-003/001-014) 中央級(jí)公益性科研院所基本科研業(yè)務(wù)專項(xiàng)基金(IMBF201206)
【分類號(hào)】：R378
【正文快照】： 結(jié)核病是目前僅次于艾滋病的世界第二大致死性傳染性疾病。據(jù)WTO統(tǒng)計(jì),僅2012年就有860萬新增結(jié)核病病例,約有130萬人因此而死亡。耐藥、多藥耐藥以及廣泛耐藥結(jié)核分枝桿菌(Mycobacteriumtuberculosis,MTB)的不斷出現(xiàn)與傳播是導(dǎo)致結(jié)核病的高死亡率最主要的原因。面對結(jié)核耐藥問

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2 楊媛;張忠兵;姜威;樊秀勇;王e，

本文編號(hào)：977082