本文關(guān)鍵詞：Smad3促進(jìn)大鼠卵巢顆粒細(xì)胞自噬

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【摘要】：目的探討Smad3基因?qū)Υ笫舐殉差w粒細(xì)胞自噬的影響。方法 21d SD雌性大鼠腹腔注射孕馬血清20 IU/只,48h后收集卵巢顆粒細(xì)胞進(jìn)行原代培養(yǎng)。培養(yǎng)細(xì)胞分為3組:空白對(duì)照組:培養(yǎng)液中不加任何處理因素;敲低實(shí)驗(yàn)組:培養(yǎng)液中加入Smad3基因特異性的SiRNA及轉(zhuǎn)染試劑RNAiMAX;過表達(dá)實(shí)驗(yàn)組:培養(yǎng)液中加入Smad3真核表達(dá)質(zhì)粒及轉(zhuǎn)染試劑Lipo 2000。免疫細(xì)胞化學(xué)方法鑒定培養(yǎng)細(xì)胞純度;Western blotting方法檢測(cè)Smad3蛋白表達(dá)變化,檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率。Smad3基因敲低及過表達(dá)后,Western blotting方法檢測(cè)自噬體膜形成標(biāo)志蛋白LC3B及自噬調(diào)控相關(guān)蛋白Bcl-2的蛋白表達(dá)變化。結(jié)果 Smad3敲低時(shí),LC3B蛋白Ⅱ型與Ⅰ型的比值(LC3BⅡ/Ⅰ)變化不明顯,Bcl-2蛋白表達(dá)明顯降低;Smad3過表達(dá)時(shí),LC3BⅡ/Ⅰ明顯增加,Bcl-2蛋白表達(dá)明顯增加。結(jié)論Smad3基因特異的SiRNA及真核表達(dá)質(zhì)�？梢杂行У剞D(zhuǎn)入大鼠卵巢顆粒細(xì)胞中,Smad3基因促進(jìn)大鼠卵巢顆粒細(xì)胞自噬,其機(jī)制可能與Bcl-2蛋白相關(guān)。
【作者單位】： 北京大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院人體解剖學(xué)與組織學(xué)胚胎學(xué)系;
【關(guān)鍵詞】： Smad 卵巢顆粒細(xì)胞 自噬 免疫組織化學(xué) 免疫印跡法 大鼠
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(30772344)
【分類號(hào)】：R363
【正文快照】： 顆粒細(xì)胞是組成卵泡的最大細(xì)胞群,顆粒細(xì)胞的增殖與凋亡對(duì)卵泡的發(fā)育成熟及閉鎖等密切相關(guān)。卵泡的發(fā)育過程不僅僅與顆粒細(xì)胞增殖與凋亡相關(guān),與顆粒細(xì)胞的自噬也密切相關(guān)[1],微管相關(guān)蛋白1輕鏈3(LC3)是自噬體膜形成的標(biāo)記蛋白,可以通過檢測(cè)其表達(dá)來評(píng)價(jià)細(xì)胞內(nèi)的自噬水平。卵泡

【共引文獻(xiàn)】

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【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：968610