本文關(guān)鍵詞：含人組織激肽釋放酶1和基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制物1基因共表達(dá)載體對(duì)大鼠血管平滑肌細(xì)胞增殖的影響

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【摘要】：背景和目的前期研究表明人組織激肽釋放酶1(hTK1)基因過表達(dá)具有部分抑制血管平滑肌細(xì)胞(VSMC)增殖和改善血管再狹窄的作用,但聯(lián)合基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制物1(TIMP1)對(duì)VSMC增殖是否具有協(xié)同效應(yīng),目前尚不明了。本研究構(gòu)建含雙基因hTK1和hTIMP1的重組腺病毒載體,并觀察其在大鼠VSMC中的表達(dá),以及對(duì)VSMC生長增殖影響。方法采用限制性內(nèi)切酶BglⅡ和SalⅠ,酶切含啟動(dòng)子CMV和hTIMP1基因片段的重組穿梭質(zhì)粒,經(jīng)PCR、連接、熱激、轉(zhuǎn)化等亞克隆至pDC316-hTK1質(zhì)粒中,構(gòu)建含雙基因hTK1和hTIMP1的重組穿梭質(zhì)粒。將骨架質(zhì)粒和穿梭質(zhì)粒于293A細(xì)胞包裝重組腺病毒載體。感染大鼠VSMC后,采用RealtimePCR法、Western blot法檢測目的基因轉(zhuǎn)錄、蛋白表達(dá)。細(xì)胞計(jì)數(shù)法和四甲基偶氮唑鹽法(MTT)測定細(xì)胞增殖。結(jié)果經(jīng)PCR、酶切和測序法證實(shí),含雙基因(hTK1和hTIMP1)的重組病毒穿梭質(zhì)構(gòu)建正確。在293A細(xì)胞中成功包裝出重組腺病毒載體Ad-hTK1-hTIMP1。感染VSMC后,雙基因(hTK1和hTIMP1)的轉(zhuǎn)錄水平表達(dá)呈現(xiàn)隨感染復(fù)數(shù)(50~150 MOI)和時(shí)間(1~3d)依賴性地增加,目的蛋白(hTK1和hTIMP1)亦呈現(xiàn)濃度依賴性地高表達(dá)。與單基因載體(Ad-hTK1或Ad-hTIMP1)相比較,雙基因載體可明顯抑制血小板源性生長因子(PDGF)誘導(dǎo)的大鼠VSMC增殖(P0.01),其峰值抑制率為45.7%。結(jié)論首次成功構(gòu)建并包裝重組腺病毒雙基因載體Ad-hTK1-hTIMP1。感染細(xì)胞后,其目的基因和蛋白均呈現(xiàn)獨(dú)立高表達(dá),并具有協(xié)同抑制VSMC增殖的效應(yīng),為血管增殖性疾病的多基因干預(yù)治療實(shí)驗(yàn)提供一個(gè)新工具。
【作者單位】： 福建省立醫(yī)院干部特診二科;福建省立醫(yī)院老年醫(yī)學(xué)研究室;福建省臨床老年病研究所;福建醫(yī)科大學(xué)省立臨床醫(yī)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 人組織激肽釋放酶 人基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制物 重組腺病毒載體 血管平滑肌細(xì)胞 基因表達(dá) 細(xì)胞增殖
【基金】：福建省自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(2011J01134;2013J01273) 福建省衛(wèi)生廳青年骨干培養(yǎng)人才項(xiàng)目(2013-ZQN-ZD-2)
【分類號(hào)】：R363
【正文快照】： 朱鵬立,余惠珍,黃舒潔,向紅,張楓,潘瑋,李峰,林帆福建省立醫(yī)院干部特診二科,福建省立醫(yī)院老年醫(yī)學(xué)研究室;福建省臨床老年病研究所;福建醫(yī)科大學(xué)省立臨床醫(yī)學(xué)院;福建福州350001血管平滑肌細(xì)胞(vascular smooth muscle cells,VSMC)增殖、遷移以及細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular ma-tr

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【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：967932