本文關(guān)鍵詞：抗HCMV Pp65蛋白單克隆抗體的制備及性質(zhì)研究

  更多相關(guān)文章： 人巨細(xì)胞病毒 Pp蛋白 雜交瘤細(xì)胞 單克隆抗體

【摘要】：人類巨細(xì)胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV)是一種機會性感染皰疹病毒,在人群中感染比較常見,但在免疫缺陷個體與新生兒中可引起嚴(yán)重的疾病。HCMV Pp65是HCMV活動感染的主要標(biāo)志,也是臨床檢驗檢測HCMV感染的重要靶標(biāo)。為研發(fā)抗HCMV Pp65蛋白單克隆抗體作為臨床免疫檢測HCMV感染的關(guān)鍵原料,本研究采用重組表達的HCMV Pp65蛋白免疫BALB/c小鼠,將免疫小鼠淋巴結(jié)細(xì)胞與sp2/0細(xì)胞融合,采用間接ELISA法篩選陽性克隆與效價測定,再用Western blotting進行抗體特異性鑒定,最后用免疫捕獲PCR和免疫熒光法評價其應(yīng)用前景。最終獲得了1株能穩(wěn)定分泌高效價的抗HCMV Pp65單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株,命名為8D6。Western blotting及間接ELISA檢測其效價分別達1∶4 000和1∶105;細(xì)胞免疫熒光與免疫捕獲PCR實驗結(jié)果說明,該雜交瘤細(xì)胞株分泌的單克隆抗體具有良好的親和力和特異性,具有作為外周血細(xì)胞免疫熒光細(xì)胞化學(xué)和免疫捕獲PCR檢測HCMV臨床感染的關(guān)鍵原料,也可作為雙抗體夾心法檢測HCMV臨床感染的關(guān)鍵原料,為建立HCMV感染快速靈敏的臨床診斷試劑打下了重要的基礎(chǔ)。
【作者單位】： 湖南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;湖南師范大學(xué)醫(yī)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 人巨細(xì)胞病毒 Pp蛋白 雜交瘤細(xì)胞 單克隆抗體
【基金】：國家自然科學(xué)基金項目(No.31072141) 湖南省科技計劃重點項目(No.2011SK2014) 長沙市科技計劃重點項目(No.K1104047-31) 湖南省自然科學(xué)基金重點項目(12JJ2013) 湖南省科技計劃項目(2013SK3129) 湖南省高等學(xué)校科學(xué)研究項目(No.10B060)
【分類號】：R392
【正文快照】： HCMV是一種核酸大小約235 kb的雙鏈DNA病毒,屬皰疹病毒科β屬。HCMV感染極為普遍[1],多數(shù)感染者無臨床癥狀,但是母親孕期感染可以導(dǎo)致胎兒感染,通過血液可以進入各種靶器官,導(dǎo)致多系統(tǒng)臟器損傷(如肺炎、少數(shù)為肝炎和腦炎),存活者伴隨著神經(jīng)性耳聾、智力低下及其它神經(jīng)系統(tǒng)后遺

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