本文關(guān)鍵詞：pcDNA3-HBsAg-p30-ROP2真核表達(dá)載體的構(gòu)建與鑒定

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【摘要】：目的構(gòu)建pcDNA3-HBsAg-p30-ROP2多基因重組表達(dá)載體,并對(duì)其進(jìn)行初步鑒定。方法根據(jù)重組體pcDNA3-p30-ROP2酶切位點(diǎn)和乙型肝炎表面抗原(HBsAg)基因序列等因素設(shè)計(jì)合成引物,擴(kuò)增HBsAg目的基因片段,再應(yīng)用酶切、連接等分子生物學(xué)技術(shù)將HBsAg目的基因克隆至pcDNA3-p30-ROP2表達(dá)載體中。應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)初篩,再采用酶切、測(cè)序等技術(shù)對(duì)構(gòu)建的重組表達(dá)載體pcDNA3-HBsAg-p30-ROP2進(jìn)行鑒定。結(jié)果 PCR擴(kuò)增出HBsAg基因片段,構(gòu)建了pcDNA3-HBsAg-p30-ROP2多基因真核表達(dá)載體。PCR與酶切結(jié)果顯示,該基因片段大小均與理論值相符;測(cè)序結(jié)果顯示該重組表達(dá)載體包含了p30-ROP2和HBsAg目的基因的完整序列。結(jié)論成功構(gòu)建了多基因重組表達(dá)載體pcDNA3-HBsAg-p30-ROP2,為進(jìn)一步研究多基因核酸疫苗奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院 山東省寄生蟲病防治研究所 山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院寄生蟲病分子免疫學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;濟(jì)南大學(xué)-山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院;山東省濟(jì)寧市第一人民醫(yī)院;山東省戴莊醫(yī)院;
【關(guān)鍵詞】： 弓形蟲 表面抗原(p) 棒狀體分泌抗原(ROP) 乙肝表面抗原 基因重組
【基金】：山東省自然科學(xué)基金(2009ZRC03083、2009ZRC03050) 山東省醫(yī)藥衛(wèi)生科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(2011HW049) 山東省濟(jì)寧市科技計(jì)劃項(xiàng)目(2013jnwk51) 山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院科技計(jì)劃(2013-01)
【分類號(hào)】：R346
【正文快照】： 乙型肝炎病毒(HBV)是不完全環(huán)狀雙鏈DNA病毒,也是至今已知對(duì)人類致病的最小雙鏈DNA病毒[1]。乙肝表面抗原(HBsAg)是HBV包膜蛋白的組分,具有良好的免疫原性,常作為乙肝疫苗的理想候選分子。目前廣泛使用的乙肝基因工程疫苗即為加工處理的HBsAg基因真核表達(dá)產(chǎn)物[2]。近年來研究

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