發(fā)布時間：2017-10-01 02:23

  本文關(guān)鍵詞：大鼠海馬組織RNA、DNA和蛋白質(zhì)共提取方法的研究

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【摘要】：目的探討Trizol法同時提取大鼠單側(cè)海馬組織RNA、基因組DNA和蛋白質(zhì)的可行性及優(yōu)勢。方法 Trizol法提取成年雄性Sprague-Dawley大鼠單側(cè)海馬組織RNA、基因組DNA以及蛋白質(zhì);商業(yè)化試劑盒提取另一側(cè)海馬組織基因組DNA,RIPA裂解液提取蛋白質(zhì)。用超微量分光光度計和SYBR實時定量RT-PCR法檢測Trizol法提取的RNA的質(zhì)量,利用超微量分光光度計和聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)法比較兩種方法提取DNA的效果及質(zhì)量,采用Western blot法比較兩種方法提取蛋白質(zhì)的效果。結(jié)果 Trizol法提取單側(cè)海馬RNA的質(zhì)量濃度介于1 178.3~2 225.8ng/μL之間,A260/280介于2.01~2.03,A260/230介于1.88~2.22,并獲得了穩(wěn)定的β-actin和GR循環(huán)域值。Trizol法和試劑盒提取單側(cè)海馬DNA的質(zhì)量濃度分別介于215.7~271.8ng/μL和268.6~872.5ng/μL之間,均適于充當(dāng)PCR反應(yīng)模板。Trizol法和RIPA裂解液提取的蛋白質(zhì)在Western blot法檢測目的蛋白含量的過程中均呈現(xiàn)清晰的條帶。結(jié)論 Trizol法提取大鼠單側(cè)海馬組織RNA的同時提取的DNA和蛋白質(zhì),與商業(yè)化試劑盒和RIPA裂解液從不同海馬組織中分別提取基因組DNA和蛋白質(zhì)的效果相當(dāng)。采用Trizol法同時提取海馬組織的RNA、DNA和蛋白質(zhì),不僅提高了實驗效率、節(jié)約了實驗成本,而且有效避免了因反復(fù)實驗操作帶來的人為干擾及誤差。
【作者單位】： 西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院遺傳學(xué)與分子生物學(xué)系;西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院環(huán)境與疾病相關(guān)基因教育部重點實驗室、生物醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)研究中心;
【關(guān)鍵詞】： Trizol 海馬 RNA DNA 蛋白質(zhì)
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項目(No.81200845)~~
【分類號】：R346
【正文快照】： 各種動物模型建立后,研究人員通常期望能夠從DNA、RNA以及蛋白質(zhì)水平對某一特定的組織或部位進(jìn)行深入的研究。但是,所研究的動物具有個體差異性,采用不同的動物分別進(jìn)行DNA、RNA以及蛋白質(zhì)3個水平的研究極有可能出現(xiàn)實驗結(jié)果的不一致性;其次,所研究的特定部位通常具有不可分割

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本文編號：951801